miR-214调节乳腺癌对阿霉素耐药的机制研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、课题解决的问题探讨miR-214表达与乳腺癌对阿霉素耐药的相关性及其机制。

二、研究方法和技术路线（一）研究方法：运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞系与正常组织样本中miR-214的表达水平。

在乳腺癌细胞株中过表达miR-214后，测定细胞增殖活性以及侵袭转移能力。

构建荧光素酶报告载体p糖蛋白的3UTR，利用荧光素酶活性检测鉴定miR-214的预测靶基因p糖蛋白。

qRT-PCR和Western blot法分别检测p糖蛋白的mRNA和蛋白质的表达水平。

（二）技术路线：1.细胞培养 人乳腺癌细胞及HEK293分别用含10%胎牛血清的DMEM/H培养基在37℃，5%CO2条件下培养。

2.总RNA提取 乳腺癌组织或癌旁正常组织从液氮取出后置于DEPC 处理的预冷匀浆器中，以100 mg/mL比例加入Trizol试剂匀浆，按照Trizol试剂操作说明提取组织总RNA并溶于20 mu;L DEPC水中，分装冻存于-80℃备用。

3. qRT-PCR 按照TaqMan MicroRNA ReverseTranscription Kit说明书加入逆转录反应所需试剂、miR-214逆转录引物、总RNA进行逆转录反应。

反转录条件：42℃ 15 min，85℃ 15 s。