1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.microrna研究背景
microrna（mirna）在动植物生物中普遍存在，是由22个核苷酸组成的小单链非编码rna分子，在真核基因表达的过程中起着重要的作用，同时也在很多生理学和病理学中扮演着重要的角色。其通过与目标mrna序列的3’非翻译区（3’utr）结合，降解靶mrna或抑制其翻译，在转录后水平调控基因表达，是许多生理学和病理学过程的主要参与者[1]。最早发现的mirna是lee等在线虫中发现的，即lin-4，研究发现，lin-4通过负调节lin-14蛋白的水平，从而导致lin-14蛋白从第一个幼虫阶段（l1）开始随时间下降[2]。研究者们逐渐意识到mirna在基因表达监管中扮演着重要的角色，越来越多的人开始研究其的特点和功能。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
此次实验旨在发现、确认mir-122的靶基因cs、dlat、gnpda1，并对其进行功能鉴定。鉴于mir-122在肝功能和肝脏病理学中的重要作用，通过对mir-122与靶基因进一步研究，揭示cs、dlat、gnpda1三个mir-122的靶基因在能量代谢、细胞增殖以及迁移中的作用机制。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法及实验方案
1.1.使用mirna靶基因预测软件，即targetscan、pictar和miranda，预测靶基因。经过双荧光素酶报告基因法筛选出mir-122与肝脏细胞相关的预测靶基因20个，在293t细胞中分别进行转染：分别转入mir-122模拟物，nc，采用lip-2000转染试剂，转染48h后收样，通过qpcr进行定量分析，确定所筛选靶基因的受抑制程度；
1.2.然后，利用western blotting对总蛋白中靶基因编码蛋白的量进行鉴定分析，通过与正常细胞的western blotting结果做对比，进一步确认筛选的靶基因是否为mir-122的靶基因。
4. 研究创新点
近几年，随着生命科学领域的发展，对miRNA的研究已经成为一个热点。miRNA在体内分布范围广泛，参与的生物学过程繁多，生物功能复杂，因此研究miRNA靶基因的鉴定，对确定其生物学功能有着重要的意义。miR-122是肝脏高表达miRNA，在肝脏的生长发育、脂质代谢和肝脏疾病等方面起着重要的作用，鉴定miR-122靶基因，并对这些靶基因进行功能鉴定，有助于揭示miR-122在肝脏的生理学、病理学等过程中的调控机制，从而更进一步地为研究与肝脏相关的疾病奠定基础。
但是miRNA靶基因的鉴定仍存在困难，由于miRNA长度限制，以及与靶mRNA的不完全结合，故对于miRNA靶基因预测及鉴定的计算机预测、生物学实验方法等仍在不断地优化和完善，旨在可以使研究者们更有针对性地、更准确地研究目标miRNA，更加准确方便地阐明其在生命活动中的功能与意义。5. 研究计划与进展
1.研究计划
2019.10～2019.11构建预测靶基因的报告基因文库；
2019.11～2019.12mrna水平以及蛋白水平验证所筛选的预测的靶基因；
