棉花中CLV3同源基因GhCLE5的转基因功能验证开题报告

 2022-02-08 20:10:49

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题意义:棉花是重要的农业经济作物之一,研究其生长发育的机制机理对于提高其产量具有十分重要的作用。

在植物的生长发育历程中clavata3就是起着关键作用的一个。

对于多细胞生物而言,细胞与细胞之间需要通过交流来行使相应的功能,调节其生长、增殖和分裂等发育过程。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:通过转基因实验初步推测棉花中clv3的同源基因ghcle5的可能功能。

研究内容:棉花clv3的同源基因ghcle5的序列信息以及两者的同源情况,gfp载体的构建和转基因拟南芥的获取和筛选,该基因对应的转基因拟南芥植株的表型观察和转基因gfp信号的检测。

拟解决的关键问题:转基因拟南芥植株的获取,发现并验证基因ghcle5的可能功能。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:1、序列比对:利用比对软件blastp对ghcle5基因(序列来自(http//mascotton.njau.edu.cn/index.htm))和拟南芥的clv3基因(序列来自tiar(http//www.arabidopsis.g/)数据库)的序列,获取该基因的相应信息。

2、基因的克隆以及载体的构建:通过棉花rna的提取与反转录、利用primer5.0完成基因引物的设计,pcr扩增及检测、dna片段的回收及克隆载体的重组连接、转化及测序、序列分析这一系列的操作步骤来克隆棉花中clv3的同源基因ghcle5。

同时,通过gfp载体上的sal i和bamh i两个酶切位点对该基因进行gfp载体的重组构建。

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4. 研究创新点

特色或创新之处:clv3作为cle多肽家族中的典型代表,对于植物的生长发育具有重要的作用和影响。

而clv3在模式植物拟南芥中的研究较多,在棉花中的研究较少且不深入,甚至极少有过其或者其基因家族相关的在棉花中的功能的报道。

本课题拟对棉花中clv3的同源基因ghcle5通过一系列实验在拟南芥中进行转基因功能验证,探究clv3的同源基因的可能功能,从而推测其对棉花生长的可能影响,进而进一步在棉花中对其开展相关的功能研究,极有可能会为培养具有更高适应环境能力的棉花材料奠定理论基础。

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5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展:2017年9月,完成序列比对和目的基因的克隆及载体构建,实验的同时,阅读相关文献进行理论知识储备。

2017年10月,完成农杆菌介导的拟南芥花期侵染实验,获得t0代转基因拟南芥种子。

2017年11月,完成转基因拟南芥阳性植株的筛选和鉴定,获取t1代转基因拟南芥种子。

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