1. 研究目的与意义
鲀科属鲀形目下的1科，通称鲀。个别种如鲀属有些体长可达900毫米。体粗短或亚长椭圆形。头及吻宽钝。主要分布于太平洋、印度洋和大西洋热带。一般栖息在近海及咸淡水中，有些能进入江河，也有少数鲀属的种类仅生活与淡水内。鲀类的肉味鲜美，但很多种类的内脏卵巢及血含有河鲀毒素，人畜误食后均能致死。河鲀毒素有止血、止痛、止痉挛等医用价值。
线粒体基因组作为一种核外遗传系统，具有小型性，自主性和多态性等特点。有关线粒体基因组的研究将有利于研究诸如基因结构与功能、基因表达的时空调控、核质互作、分子进化规律、物种的起源与分化以及线粒体的起源等生物学重要课题。nadh脱氢酶亚单位1(nadhdehydrogenasesubunit1)基因和nadh脱氢酶亚单位2(nadhdehydrogenasesubunit2)基因是线粒体dna(mtdna)的两个蛋白编码基因,它们是nadh脱氢酶的两个亚基,而nadh脱氢酶是呼吸链复合体Ⅰ的主要组成,其在呼吸链中直接参与氢与电子传递并通过氧化磷酸化产生atp,进而参与能量代谢作用。
线粒体nd2基因进化速率相对较快。近年来，nd2基因在鸟类、鱼类和两栖类动物的分子系统学研究中得到了广泛的应用,充分显示出其良好的分子标记特性。
2. 研究内容和预期目标
在核酸分子水平上对鱼类进行种质鉴定、多样性评估，并探讨它们的亲缘关系和系统演化，是目前鱼类遗传育种、资源评估和起源进化研究最有效的手段。本文拟选取线粒体nd5基因进行研究，采用pcr方法，从暗纹东方鲀肝组织线粒体细胞中克隆nd5基因序列并测序，经过生物信息学软件分析比较暗纹东方鲀的nd5基因序列与已知的鱼类序列的同源性程度，同时通过系统发育分析方法对nd5的基因序列结构作相应分析，为进一步研究nd5的功能提供实验数据。
主要研究内容：
（一）鲀科鱼类基因组dna的提取（二）暗纹东方鲀线粒体dn2基因的克隆和鉴定；（三）鲀目鱼类nd2基因序列分析以及系统进化树的构建。
预期目标：（一）提取实验所需的目的基因（二）对提取的目的基因进行pcr扩增（三）序列测定
3. 研究的方法与步骤
(一)鲀目鱼类dna的分离方法优化；
1.1实验材料和试剂：
选取暗纹东方鲀，活体解剖取肝脏或肌肉，用ste缓冲液漂洗后，-80℃保存备用。
4. 参考文献
[1] 王奎旗, 陈梅, 高天翔. 东方鲀属鱼类的分类与区系分布研究[j]. 青岛海洋大学学报(自然科学版), 2001, 31(6): 855-860.
[2] 万蓁蓁. 红鳍东方鲀幼体发育和消化生理的研究[d]. 2005.
[3] 崔建洲, 申雪艳, 杨官品, 等. 红鳍东方鲀与假睛东方鲀的微卫星dna多态性分析[j].高技术通讯, 2005, 15(12): 90-96.
5. 计划与进度安排
1、2022年3月1日---2022年3月25日，接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告；
2、2022年4月5日---2022年5月4日，原材料制备，完成实验前准备工作，配制各实验所需药品；学习提取鱼的基因组dna，its1基因，学会使用pcr仪，对pcr反应体系，循环参数进行摸索和调整等措施，学会制胶，学习制备感受态细胞，pcr目的基因。
3、2022年5月5日---2022年5月27日，完成pcr扩增产物的鉴定与割胶回收，回收纯化产物与载体连接，转化到大肠杆菌dh5α感受态细胞中，利用白斑筛选阳性克隆，用质粒dna小量试剂盒提取质粒，用双酶切鉴定阳性菌落，阳性菌落质粒dna送到生物公司进行测序。
