利用等温扩增技术(LAMP)可视化检测开心果过敏原任务书

 2022-11-20 10:58:58

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

本课题的目标是利用环介导等温扩增技术可视化检测开心果过敏原。

开心果由于它的良好的保健功能和感官特性在世界各地广受欢迎。然而,开心果是一种重要的食物过敏原。所以建议易感个体的最佳方法是严格避免开心果。市面上的一些开心果制品会在食品标签上标明含有开心果成分,但是仍有少部分商品可能是无意污染或者是恶意替换,并没有在食品标签上标明是否含有开心果成分。因此,有必要建立可靠的食品中开心果的检测方法,本研究采用了环介导等温扩增(LAMP)法。这种分析对开心果高度特异,适用于煮沸、蒸压处理后的样品及商业食品的检测。因此,该lamp分析法可用于现场检测食品中可能含有的开心果,从而保护致敏个体免受隐藏的过敏原的侵害。

2. 实验内容和要求

本课题任务的内容和要求是熟悉利用环介导等温扩增技术检测食品中过敏原的方法,熟练掌握可视化检测开心果过敏原的方法和原理。

环介导的核酸等温扩增技术( loop -mediated isothermal amplification,LAMP )是由 Notomi 等在2000 年发明出来的一种新型核酸扩增方法 。该方法针对靶基因的六个保守区域设计四条特异性引物,利用 具有链置换活性的Bst DNA 聚合酶,在恒温条件下(65°C左右)放于水浴锅或恒温箱保温约 60 分钟即可完成整个核酸扩增反应。该法除了能出分子量大小不同的茎环 DNA 以 外,还能产生肉眼可见的反应副产物 --- 白色焦磷酸镁沉淀。当我们在反应体系 中加入钙黄绿素和氯化锰时,在反应初期并不发出荧光,反应后期由于焦磷酸根离子更易与锰结合进而释放出钙黄绿素进发色的荧光,即结果是可视化的。该方法具有特异性高 、灵敏度强 、操作简单快速 、成本低廉等优点。

3. 参考文献

[1]张维强,张杨.环介导等温扩增技术在细菌性肠道传染病诊断中的应用研究进展[j].医疗装备,2019,32(04):196-197.

[2]李子微,宾蕾,尹艳,高琦,赵勇,张平平,潘纹玉,陆沙,邓仲良.实时荧光环介导等温扩增技术检测土壤中的类鼻疽伯克霍尔德菌[j/ol].中国人兽共患病学报:1-10[2019-03-27].

[3]苑宁,石磊,王永,陈发荣,时凡,徐慧,贾丽娜,张伟.实时荧光环介导等温扩增技术快速检测牛肉中的大肠杆菌o157[j].食品安全质量检测学报,2018,9(24):6489-6495.

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4. 毕业设计(论文)计划

2022.11-12进行文献的查阅,并仔细阅读文献,了解环介导等温扩增技术的原理,以及大概的一个实验流程。

2022.1-2进行实验方案的确定,以及实验所需材料和试剂的准备工作。

2022.2-3进行目标基因的选择、引物的设计以及检测体系的的建立。

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