德拉沙星原料药残留溶剂方法学验证
德拉沙星 (delafloxacin, 商品名BAXDELA) 是由日本Wakunaga制药公司和美国Melinta生物公司共同研究开发的最新一代广谱氟喹诺酮抗菌药物，其对于革兰氏阳性菌有较好疗效，适用于急性细菌性皮肤及皮肤结构感染。[1]与此同时，德拉沙星对大量的高耐药菌显示出了广泛的抗菌活性,它还有可能作为多种严重感染的替代治疗药物,有望成为临床对抗耐药菌感染的有力工具。作为抗菌药物，德拉沙星在生产过程中会使用各种有机溶剂，最终产品也因此会残留这些溶剂,残留量的多少会直接对产品的质量及人体造成伤害，本文就将对于德拉沙星原料药中的残留溶剂的检验方法进行方法学验证。
在德拉沙星原料药的合成过程中，常常会引入丙酮、乙醇、乙腈、甲醇和异丙醇等共九种有机溶剂，故而在最初的原料药粗品之中这些有机溶剂都会有不同数量的残留。[2]对于残留溶剂的定性定量分析，一般采用GC和HPLC两大色谱方法。对于丙酮、乙醇和乙腈而言，由于前两者遇热易挥发，往往采用气相色谱的方式进行检验，而乙腈则是液相色谱中流动相的成分，故而利用HPLC并不能有效检出，所以还是气相色谱方式，甲醇和异丙醇等剩余的六中有机溶剂则可以通过HPLC正常检出。在明确大体的分析方法后，具体的色谱条件例如进样量、色谱柱的选择、柱温、流速以及合适的检测器则需要根据以上物质在不同条件下的色谱行为进行摸索和筛选，选择最为合适的方法。在明确分析方法和相关色谱条件后，就需要进行对此方法的评价，即方法学的验证工作。
无论是气相色谱还是液相色谱，方法学的验证内容都是相对固定，共分为8个方面，分别为专属性、准确度、精密度、检测限、定量限、线性、范围及耐用性。[3]专属性指样品中可能存在其他成分的情况下，所用分析方法能够准确地、选择性地检识被测组分的能力，又称为选择性或专一性。主要是考察杂质及其他成分对待检成分测定结果的影响.可通过空白试验来考察。准确度指在一定实验条件下多次测定的平均值与真值相符合的程度，以误差来表示，常用来表示系统误差的大小，在色谱分析方法中评价准确度好坏的的指标为回收率，根据药典标准，在线性范围内，低浓度时各数据应为标准值的80%-120%，中高浓度时各数据应为标准值的85%-115%。与准确度联系紧密的另一指标则是精密度，系指在规定条件下所得独立试验结果间的符合程度，一般以RSD数值的大小来评判该方法精密度的好坏，根据药典标准，在低浓度时各组数据的RSD值不得大于20%，在中高浓度时各组数据的RSD值不得大于15%。在精密度的考察中，会分为更多的细项，例如批间精密度、日间精密度等。检测限和定量限两者的验证则更为接近，用于评价的指标都是在分析条件下仪器的信噪比，检测限为仪器对待测物质产生响应时待测组分的最低浓度，往往当信噪比s/n达到3时即可认为该物质可检出，定量限为仪器能够对待测组分进行定量分析时待测组分的最低浓度，信噪比s/n的要求则需要达到10，所以一般而言，检测限更偏向于定性分析，定量限更为注重定量分析，与此同时检测限也是反映分析方法和仪器灵敏度的指标，检测限越低说明灵敏度越高，尤其是在微量分析乃至痕量分析的方法验证中，由于待测组分本身浓度极低，故而对于方法灵敏度要求极高。线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样内被测浓度成比例关系的程度，评价的标准则为线性方程中R值的大小，一般R大于等于0.999则表明该浓度范围内线性良好。范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。考察方法是通过把含有被测物的样品在范围的两个极端和范围内进行测试，考察是否可达到精密度、准确度的线性的要求。耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。往往考察的因素包括：分析溶液的稳定性；样品的提取次数、时间；液相色谱方法；流动相pH值变化的影响；流动相组分变化的影响；不同色谱柱；温度；流速。一般而言，当确立的分析方法能够在以上的八个方面中均达到相应的标准，则可以认为该分析方法良好。鉴于本方法的研究对象为德拉沙星原料药的残留溶剂，偏向于定量分析，因此对于方法的准确度、精密度、定量限和线性范围的要求更高考察也更为严格，原料药由于还未进行工艺加工，没有辅料干扰，对于方法的专属性要求反而不是很高，故而与检测限等都不是验证重点。
综上所述，本课题的工作内容主要有两方面，一为分析方法和条件的确立，二为对确定的分析方法进行相关的方法学验证并进行评价总结，故而在毕业设计的三个月中需要做出如下的时间安排：现拟于在3月28日前，完成论文课题的确立，在实习单位掌握相关仪器的使用方法并进行对于德拉沙星原料药残留溶剂分析方法的摸索；在4月5日前确定最终的残留溶剂分析方法；在5月12日前完成8项方法学验证的实验工作并整合实验结果；在5月26日前对实验结果进行分析并完成论文的撰写。
参考文献：
[1]CANDEL F J, PEuml;nUELAS M.Delafloxacin:design, development and potential place in therapy[J].Drug Drug Des Devel Ther, 2017, 11:881-891.
[2] 王秀娟,赵绪亮. 一种改进的德拉沙星的精制方法[P]. 山东省：CN106831723B,2020-07-28.
