开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究背景
肿瘤是指在多种致癌因素的作用下，局部细胞异常增殖产生的新生物。肿瘤可分为良性肿瘤和恶性肿瘤，恶性肿瘤就是人们熟知的癌症。肿瘤发生后会造成机体的负担或损伤，良性肿瘤产生的负面影响较小，大多是对周围组织的挤压和阻塞；如果没有及时发现并治疗，良性肿瘤可发展为恶性肿瘤，恶性肿瘤对身体的伤害较为严重，其能通过夺取营养物质、浸润正常组织器官和转移扩散破坏机体正常生理功能。癌症已成为世界各类疾病中的第二大死因，根据2021中国肿瘤登记年报，我国是癌症大国，患癌总人数占世界的40%，每天约1万人确诊癌症。现在临床上对癌症的治疗手段包括：手术切除、化疗、放疗、免疫疗法、生物治疗、干细胞移植等。在癌症初期，可以通过切除和物理方法治疗，但是一旦发生转移或对于复发癌症，这种局部治疗方法效果很差。在癌症中晚期的普遍治疗手段就是化疗，但化疗药物对肿瘤部位的选择性差，副作用大，临床应用受到很大限制。目前，社会对癌症治疗药物需求大、需求紧，癌症药物研究势在必行，要研究出有效的治疗药物，并发展多种药物递送方式。
自从1953年科学家们成功合成首个具有生物活性的多肽以来，多肽和蛋白质类药物就受到了广泛的关注[1]。蛋白质药物和小分子药物相比，具有活性强，治疗针对性强、毒副作用较小、用量少等优点；与此同时由于本身的性质，蛋白质有三维结构对功能影响大而其稳定性低、体内蛋白酶多易被水解、半衰期短[2]等缺点，给蛋白质药物的发展带来了很大的挑战。随着药物作用靶点的研究，部分蛋白质被发现能够作用于细胞内靶点发挥作用，而目前的蛋白质递送策略尚不完善，存在血清耐受程度低和内体逃逸差等问题，这给蛋白质药物递送提出了更高的要求。近些年，随着免疫治疗和新型递送材料的发展，蛋白质药物胞内递送体系也获得了发展，促进蛋白质跨膜进入细胞发挥作用的方法主要可以分为四种：物理方法、蛋白质修饰法、纳米载体递送法和高分子载体递送法。
自噬（autophagy）是一种基本的，高度保守的细胞内降解过程，自噬的功能是清除细胞内受损的大分子物质和功能失调的细胞器[7]。目前大多数治疗癌症的放射疗法和化学疗法都是基于细胞凋亡（Ⅰ型程序性细胞死亡）进行的，而肿瘤细胞很快就会对其产生耐药，导致疗效不佳。目前，已有证据表明过度激活细胞自噬（autophagic cell death，ACD）能够抑制肿瘤的发生和发展[8]。
Beclin-1是Ⅲ类磷脂酰肌醇3（classⅢ PI3K）复合物的核心组成部分，其可诱导自噬小体的组成[9,10]。作为一种单倍剂量不足基因，Beclin-1在卵巢癌（75%）、乳腺癌（约50%）、前列腺癌（约40%）组织中都有单等位基因缺失[11,12]。越来越多的证据表明上调Beclin-1在细胞内的表达能够加快乳腺癌细胞的死亡并抑制肿瘤发展。然而，由于Beclin-1肽链不能进入细胞、稳定性较差、特异性低[13]，其在抗肿瘤药物方面的发展非常受限。已有文献指出，将Beclin-1与递送载体分子结合，能增强其诱导肿瘤细胞自噬的能力。
二、拟解决的科学问题
课题组前期根据肿瘤微环境的低pH及肿瘤部位高表达MMP-2酶的特性，构建了一种能够靶向肿瘤部位的蛋白胞内递送分子——ASCP，其包括屏蔽序列、MMP-2酶切位点及超电荷聚多肽。课题组已通过连接绿色荧光蛋白（GFP）作为模式蛋白，初步验证了在肿瘤偏酸性且高表达MMP-2酶的环境中，肿瘤细胞对ASCP-GFP有较高的摄取率。
本实验将自噬诱导分子Beclin-1与ASCP结合作为活性分子，以人乳腺癌细胞MDA-MB-231作为待研究肿瘤细胞，探究ASCP-Beclin-1的抗肿瘤活性。
三、技术路线
