研究目的
①光学性能、较好的生物相容性及丰富的表面活性为多功能纳米复合物的构建提供了科学基础:近年来纳米技术领域的研究表明,荧光量子点是一类极具前景的纳米材料;而ZnO量子点又克服了传统荧光量子点一直以来生物毒性大的难点。以此类材料为基础,在其表面进行多功能化修饰,再装载上药物,即可得到一系列具应用价值的新型多功能纳米材料(集聚实时示踪、靶向药物传递、抗菌药物活性一体)。
②细菌靶向肽是一种新的高效快速识别能手:一小段经体外筛选得到的抗菌肽中间序列,能与细菌膜进行高亲和力和的特异结合,其结合亲和力与抗体相当甚至更强,且具有合成简单快速、适用范围广、易于化学修饰及多功能化的优势。本课题正是基于以上优势,选择合适的多肽序列实现对细菌的靶向传递,从而达到细菌感染早期诊断及提高传统化学药物抗菌活性的目的。
研究内容
本课题拟选择金黄色葡萄球菌(SA),大肠杆菌(EA),枯草芽孢杆菌(BS)作为纳米复合物对细菌亲和性考察的对象。通过定时、定量的孵育过程及可见波段黄色荧光的检测,比较LOF@ZnO-MPA与LOF@ZnO-PEP-MPA在不同细菌中的分布情况,以此对比多肽修饰前后的纳米复合物对细菌靶向能力;进一步,采用block实验验证多肽修饰的纳米复合物细菌特异性。
根据国际标准化组织(ISO)规定,课题采用评价生物医用材料生物相容性的标准实验进行荧光探针的体外细胞毒性考察。细胞毒性试验采用人胚肺纤维正常细胞(HELF)及人正常肝细胞(L02),模拟生物体内生长环境进行培养,检测荧光探针接触细胞后生物学反应,包括细胞发生生长抑制,功能减弱,溶解,死亡等毒性反应。利用MTT比色法检测细胞活性来反映细胞生长抑制程度;更进一步,通过细胞膜、细胞核、骨架蛋白等特异性染料进行细胞染色;结合激光共聚焦荧光显微镜观察反映细胞功能减弱、溶解、死亡等毒性反应,并利用Proplus软件进行图像分析,比较不同荧光探针作用下的细胞生长抑制情况
研究方法
1)LOF@ZnO-PEP-MPA对细菌抑制考察及诱导细菌凋亡的形态观察和定量分析
选用金黄色葡萄球菌(SA),大肠杆菌(EA),枯草芽孢杆菌(BS),参照已有文献报道的标准程序,采用抑菌斑法和E实验比较不同给药组(LOF, LOF@ZnO-MPA与LOF@ZnO-PEP-MPA)对细菌生存的抑制情况。同时得到不同给药组的最低抑菌浓度。
- LOF@ZnO-PEP-MPA抗多重耐药菌活性评价
选择泛耐药铜绿假单胞菌(PDR-PA),考察不同给药剂量下的LOF,LOF@ZnO-MPA与LOF@ZnO-PEP-MPA对细菌的抑制效果,得多不同给药组的最低抑菌浓度。
