融合蛋白His-MMP2的表达、分离以及纯化文献综述

一、本课题旨在对融合构建的His-MMP2蛋白进行纯化，探究其纯化方法，以获得较纯的融合蛋白，为以MMP-2为靶标的蛋白疫苗的抗肿瘤研究做准备。

二、研究手段1.融合蛋白最佳诱导表达条件的探究1.1生长曲线的测定1.2探究最佳乳糖诱导浓度1.3探究最佳乳糖诱导时间2.融合蛋白表达形式的确定3.融合蛋白的分离纯化3.1菌体破碎3.2 Ni-NTA树脂的再生3.3融合蛋白的亲和层析3.4透析除盐及冻干三、文献综述以MMP-2为靶标的抗肿瘤研究摘要：目前，恶性肿瘤已经成为威胁人类生命健康的重要因素，肿瘤免疫疗法（包括单克隆抗体，免疫佐剂，过继性T细胞以及肿瘤疫苗等方式），尤其是肿瘤疫苗正在发展成为现代肿瘤治疗继手术切除、放疗和化疗之外的另一种治疗模式，而且特异性更好，毒副作用更小。

由于MMP-2在进化上高度保守，已经成为肿瘤免疫的重要靶标之一。

本文主要介绍MMPs与肿瘤等疾病的关系（主要是MMP-2），旨在研究MMP-2DNA疫苗所激发的免疫应答及抗肿瘤效应，并探讨其抗肿瘤机制。

关键词：肿瘤疫苗，肿瘤抗原，MMP-2，多表位DNA疫苗Anti-tumor Study on MMP-2 TargetingAbsrtact: At present, malignant tumor has become an important factor threatening human life and health. Tumor immunotherapy (including monoclonal antibodies, immune adjuvants, adoptive T cells and tumor vaccines), especially tumor vaccines, is developing into another treatment mode in modern tumor therapy, besides surgical resection, radiotherapy and chemotherapy, Because MMP-2 is highly conserved in evolution, it has become one of the important targets of tumor immunity. This paper mainly introduces the relationship between MMPs and diseases such as tumor (mainly MMP-2).Aim To study the immune response and anti-tumor effect induced by MMP-2DNA vaccine explore its antitumor mechanism.Keywords: Tumor vaccine, Tumor antigen, MMP-2, Multiepitope DNA vaccine1 介绍基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）是一类能够降解细胞外基质的锌离子依赖性内肽酶，迄今已发现23种(1)。

在人体内，它们不仅参与了多种生理过程，如胚胎发育、创伤愈合和妊娠反应等(2-4)，而且大量研究表明，MMPs的异常表达如肿瘤、炎症和动脉粥样硬化等多种疾病密切相关 (1, 5-7)。

MMPs不仅可通过降解细胞外基质促进肿瘤细胞的侵袭、转移，而且可以特异地水解和加工多种细胞信号分子，通过信号传导途径调节肿瘤细胞的行为(8)。

MMP-2，即明胶酶A，其初合成产物(1~660 aa)由信号肽、前肽、催化域、铰链区和hemopexin样结构域组成。

MMP-2以72kD无活性的酶原形式合成分泌，切除前肽后得以激活。