探究lncRNA TRAF3IP2-AS1对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响文献综述

课题名称 研究lncRNA TRAF3IP2-AS1对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响课题性质 radic; 基础研究应用课题 设计型 调研综述 理论研究开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）一、研究目的：实验室前期研究发现lncRNA TRAF3IP2-AS1在肥胖者胰腺细胞当中低表达并具有相关功能，且有相关研究表明肥胖是胰腺癌的诱因之一。

本课题旨在研究lncRNA TRAF3IP2-AS1对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响，并初步探讨其作用机制。

二、研究手段：1、细胞培养和感染细胞系人胰腺导管上皮细胞株HPDE-C7、人胰腺癌细胞株MIApaca-2、Panc-1快速复苏后重悬于含10%胎牛血清的细胞培养基中，放置在37℃、5%CO2培养箱中。

次日观察细胞生长情况，适时更换培养基。

2、细胞总RNA提取及qRT-PCR检测lncRNA TRAF3IP2-AS1的表达2.1组织和细胞总RNA的提取(1) 预冷氯仿，异丙醇，75%乙醇（用无RNA酶的水配制），DEPC水；(2) 细胞、组织处理：取适量细胞沉淀置于RNA酶EP管中，加入1 mL TRIZOL，轻轻吹打至细胞团块散开；或取适量组织，置于RNA酶EP管中，加入1 mL TRIZOL，用匀浆机进行匀浆，使组织细胞充分裂解，室温静置5 min；(3) 加入200 mu;L的预冷氯仿，剧烈振荡15-20 s，4℃或冰上静置10 min；(4) 4 ℃，13000 rpm，离心10 min，转移上层水相到新的无RNA酶的EP管中；(5) 向该EP管中加入等体积预冷的异丙醇溶液，颠倒混匀，-20 ℃放置10 min；(6) 4 ℃，13000 rpm，离心10 min，弃上清，加入1 mL 预冷的75 %乙醇洗1次；(7) 4 ℃，13000 rpm，离心2 min，用枪小心吸弃液体；(8) 室温静置晾干（约15 min），加入适量体积无RNA酶水，溶解RNA，进行相关检测或于-80℃保存备用。

(9) RNA浓度和纯度测定：将提取好的RNA置于冰上待测。

吸取2 mu;L RNA溶液加入到Biotek Take 3微孔板中，以DEPC水作对照，测定样品A260、A280及A320的值。

以A260/A280的比值作为RNA纯度的检验标准，比值在1.9-2.1之间可看作得到纯的RNA。

小于该比值一般认为是基因组DNA或蛋白质污染。