重组米根霉脂肪酶的高密度发酵开题报告

1. 研究目的与意义

研究目的：探讨确定产生最高脂肪酶酶活水平的最佳发酵条件。

研究意义：探索高效脂肪酶的批量制备条件，为酶法生产生物柴油新工艺产业化提供有力的技术支持。

2. 国内外研究现状分析

巴斯得毕赤酵母表达系统是上世纪80年代初期发展起来的一种新型的外源蛋白表达系统，它既具有原核表达系统操作简易、易于培养、生长速度快、表达量高、成本低等优点，还具有原核生物表达系统所不具有的对外源蛋白的翻译后修饰等特点，如糖基化、蛋白磷酸化等。同时它还避免了酿酒酵母分泌效率差、表达菌株不够稳定、表达质粒易丢失等缺陷.随着巴斯德毕赤酵母表达系统的不断发展和日趋完善，许多具有商业价值的外源蛋白在此系统中得到了成功表达。由于其表达载体上醇氧化酶基因强启动子的作用，外源蛋白的表达量很高.最重要的一个缺陷就是分泌表达的蛋白在培养基中被自身分泌的蛋白酶降解，由于甲醇酵母多采用高密度发酵，蛋白酶也会随着细胞密度的增高而增高。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：本研究拟在改变米根霉脂肪酶基因序列的基础上，并增加其在毕赤酵母中的拷贝数，将毕赤酵母重组菌在10L发酵罐中进行高密度发酵，确定能产生最高脂肪酶酶活水平的最佳发酵条件，进一步优化RML发酵培养条件，以提高其产量。基于重组米根霉脂肪酶具有高活力及高稳定性等特点，可大幅提高酶法催化的效率，可为酶法生产生物柴油新工艺产业化提供有力的技术支持。

计划：3月，改变条件：蛋白水解物的添加浓度;4月，改变条件：发酵菌种的接种浓度和尝试其他的氮源添加物来防降解；5月，改变条件：继续完善定向突变的拷贝数，尝试筛选出高活力难降解的菌种。

4. 研究创新点

采用了添加不同浓度的酪蛋白水解物和其他氮源来防降解，同时尝试定向突变，筛选高活力难降解的菌株，为酶法制备生物柴油的提供大量的高活力脂肪酶提供很好的空间。