水稻耐盐基因MYBc与泛素E3连接酶互作验证及功能研究开题报告

 2022-01-23 20:52:03

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.本课题研究的意义1.1盐胁迫研究概述土壤盐渍化(soil salinization)是指土壤底层或地下水的盐分随毛管水上升到地表,水分蒸发后,使盐分积累在表层土壤中的过程,也称盐碱化。

土壤盐渍化是世界范围内面临的环境问题,全世界约8千万公顷的土地遭受盐渍化的侵蚀[1],中国盐渍土分布范围广、面积大、类型多,总面积约1亿hm2,是制约农业生产的重要因素。

土壤中过量盐离子会对植物造成渗透胁迫和离子毒害,导致农作物生长速度减缓,产量下降。

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3. 研究的方法与方案

1.研究方法1.1烟草瞬时表达方法取光照/黑暗16/8小时,23-24℃培养4周左右的烟草,用1 ml一次性注射器吸取侵染液重悬的转有表达质粒的农杆菌液,从烟草叶片的背面注入到叶片中,适宜培养条件下表达48-60小时。

1.2 gus活性测定将植物组织加液氮研磨成粉末,加入gus蛋白提取液后离心,收集上清冰上保存。

之后取少量样品蛋白提取液,加入到反应液中,在反应进行中的第20 min和第40 min各取20l反应混合液加入到180l na2co3溶液中停止反应;分别在激发波长365 nm,发射波长455 nm下测定荧光值,1.3质粒提取方法:将转有待提质粒的大肠杆菌单菌落接种于10 ml 含合适抗生素的lb液体培养基中,37℃,200转/分钟,摇菌14-16小时;之后将上述菌液转接到1l新鲜含合适抗生素的lb液体培养基中,37℃,200转/分钟,摇菌过夜;收集菌体后按照质粒提取试剂盒提取质粒。

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4. 研究创新点

目前在植物中尚未见MYBc转录因子互作蛋白的相关研究报道,关于互作的效应以及互作后对OsHKT1;1基因响应抗盐胁迫的作用也没有具体的报道。

本课题将以研究二者的互作效应为重点,研究结果将为调控OSHKT1;1表达响应盐胁迫,提高水稻抗盐性提供理论基础。

5. 研究计划与进展

2016.9-2016.10 进入实验室学习,熟悉实验环境,查阅相关资料为今后实验做充分准备2017.11-2017.2 在酵母双杂交试验的基础上,进一步利用bifc、coip、pull down等实验方法验证mybc与互作蛋白mrfp存在互相作用,并通过gus活性测定等方法来探究二者互作后对oshkt 基因在抵抗盐胁迫中的作用效果。

体外泛素化进一步实验证明mybc转录因子是mrfp的泛素化底物。

2017.3-2017.5 数据汇总整理并进行综合分析,课题总结并撰写论文

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