pheS*基因的改造以及在Bacillus subtilis 168中的表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

芽孢杆菌（bacillussp.）是在工业发酵和微生物分子遗传学领域具有重要价值的革兰氏阳性菌。目前利用能独立复制的质粒对该菌进行遗传改造,是构建枯草芽孢杆菌基因工程菌的重要方式。近几年已在芽胞杆菌中成功表达了多种基因，大多通过电击转换的方式进行外源基因的导入。但不同菌种所需的条件有所不同，国内外在摸索芽孢杆菌电转条件上已有研究。随着研究的深入，摸索到简便适宜的电转条件对芽孢杆菌后续基因工程操作有深远意义。

参考文献

【1】嗜碱芽孢杆菌电转化方法的优化成堃，路福平，黎明，等。

2. 研究的基本内容和问题

本研究将克隆Phe以及其突变体基因，构建载体。研究最适电转条件，使其在芽孢杆菌内表达。通过Phe基因野生型和突变体作为筛选标记进行筛选。摸索芽孢杆菌方法优化。

3. 研究的方法与方案

运用多轮pcr以及phusion进行phe基因扩增，获得特异性极强的phe基因。运用taq进行添加a尾，与t载体连接构建载体。将构建载体电转导入芽孢杆菌进行表达。

本实验中运用到基因操作技术，包括使用高保真phusion酶对目的基因进行扩增，目的基因与载体连接，构建成特异性质粒。所构建质粒包含特异性筛选标记以及特异性酶切位点。将构建的包含目的基因的质粒点击转换导入芽孢杆菌。电转后进行后续培养筛选，分析电转效率。

实验方案大致包括五个步骤：

4. 研究创新点

本实验选用目前研究广泛的芽孢杆菌作为研究对象，具有材料简单易寻，对后续芽孢杆菌研究应用均有帮助。

5. 研究计划与进展

2014.02－2014.03资料查阅、实验方案确定和可行性分析；

2014.03－2014.04扩增基因，构建载体，电转并培养

2014.04－2014.05论文撰写与修改。