1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
意义:在资源与环境等世界性问题日益严重的今天,藻类的开发与应用研究具有重要的社会经济价值。然而在藻类的开发与利用中藻类的鉴定及其分类则是藻类应用的前提和基础。通过分子生物学方法对藻类进行分类鉴定可以避免传统分类学鉴定的不足。传统的形态学观察,并不能保证完全可靠。如果有毒株系和无毒株系如果鉴定错误,将造成巨大的经济损失和生态灾难。而对于人类大力开发海洋资源来说从海洋中获取更多高值的微藻品种成为一项重要的基础性工作。
应用前景:微藻含有丰富的营养,尤其是脂肪酸,多糖含量充足,科学家希望找到一种生长快,含油量高的微藻,在大量吸收二氧化铁的同时,积累大量的脂肪酸,用于制造生物柴油。而大量微藻材料的获得,是该研究的基础。对获得的微藻进行准确的鉴定,更是微藻研究的基础性工作。对微藻进行分类和鉴定,可对以后微藻类物质的
提取和应用提供很大的便利。
2. 研究的基本内容和问题
本论文研究目标及关键问题就是对一株极地小球藻进行分子鉴定,细化到种的分类。本论文首先对从北极环境采集到的一株微藻进行了分离纯化,之后进行纯培养,提取DNA测序,分别进行18srRNA,16srRNA,ITS序列分子鉴定,进行序列分析构建进化树。在整个鉴定过程中,使用了普通显微镜进行形态学观察,以及分子鉴定。多种方法鉴定的结果相互印证,并探讨每一种方法的优缺点。说明该方法的可行性。
3. 研究的方法与方案
研究方法及实验方案:通过ctab法提取藻类dna,借助pcr技术可以方便快捷的扩增rrna片段,并进行序列测定。之后应用blast软件,将测定的rrna核酸序列在国际核酸数据库genbank中搜索比对,找出与它同源性较高的匹配序列,将测得的核酸序列序与找出的同源性较高的相似性序列构建系统进化树,从而更进一步的判断物种分类属性.
技术路线:样品收集→形态观察→提取dna→进行pcr扩增→克隆和测序→分析序列
可行性分析:通过很多文献查阅找到了提取藻类dna的可行方法,通过文献中pcr的设定和平时做pcr所得经验可以顺利对目标序列进行扩增,ncbi数据库上已有大量的小球藻种的genebank及序列,方便比对。
4. 研究创新点
没有单一运用一种引物进行扩增,使用18srRNA引物,16srRNA引物以及ITS序列引物分别扩增,相互印证该藻种的分类属性。
对藻种做了三个重复序列,使结果更加准确。
5. 研究计划与进展
2014.3至2014.4中旬完成藻种的分离纯化及培养,以及形态学鉴定,阅读相关文献,撰写中期报告
2014.4中旬-2014.5上旬对藻种进行,dna提取,pcr扩增,电泳观察,送去公司测序,阅读相关文献
2014.5中旬对序列进行分析鉴定,制作进化树,撰写毕业论文
