真菌次级代谢产物引起Hela细胞自噬开题报告

 2022-02-07 17:04:11

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

自噬是一种高度保守的细胞降解过程,衰老的细胞器和异常的蛋白等联合胞质被隔离在双层膜囊泡(自噬体)中,然后自噬体与降解性的细胞器如溶酶体或液泡发生膜融合,在其中进行分解,形成小分子物质重新加以利用[1]。在大多数细胞中自噬保持着本底水平,但在饥饿、损伤、激素刺激、一些化学物质(如长春碱等)作用下,自噬被诱导,使细胞内自身不需要的细胞器降解并重复利用[2]。自噬对于细胞的发育、分化起到重要作用,也可能与肿瘤的抑制和寿命的延长有关,其还有免疫性作用,可以抵抗病原体。机体细胞的自噬功能如果发生障碍,可能导致肿瘤、神经退行性疾病等病症[3]。近年来对于自噬研究发展迅速,已成为一个热门的科学研究领域。

化合物gliocladicillin c (c77)是从西藏林芝采集的冬虫夏草共生菌中分离的gliocladium sp.的发酵产物中获得的多硫代二氧基哌嗪(epipolythiodioxopiperazines ,etps) 族结构化合物,该分子能够引起3种结肠癌(hct116,sw480与sw620)细胞的失活,并能导致肿瘤细胞的自噬,并先于caspase依赖的细胞凋亡发生,对调亡有一定的促进。

化合物11'-deoxyverticillin a(c42)也是一种从冬虫夏草共生菌中分离得到的多硫代二氧基哌嗪 族结构化合物,有研究发现c42能够显著抑制细胞系pc3m细胞生长[4],并增加caspase-3/7 的活性及parp 的剪切,c42 能够诱导caspase 依赖的细胞凋亡。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:

本课题拟结合tem、蛋白质印迹法、荧光显微检测法、rt-pcr等多种不同的自噬检测方法分别检测c77和c42对不同细胞系自噬及凋亡的影响,以探究其影响自噬及凋亡的相关机理。

研究内容:

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3. 研究的方法与方案

研究方法:

1.单独加药处理:用不同浓度的药物处理细胞(t24、a431、hela等),观察细胞自噬变化。

2.蛋白过表达:运用转染技术,在细胞内过表达目的蛋白,运用western blot技术,观察细胞自噬相关蛋白的变化。

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4. 研究创新点

C77、C42是从冬虫夏草中分离的真菌中提取的ETPs,对于这两种分子引起的细胞自噬的研究鲜有报道,本课题拟结合TEM、蛋白质印迹法、荧光显微检测法、RT-PCR等多种不同的自噬检测方法分别检测C77和C42对不同细胞系自噬及凋亡的影响,以探究其影响自噬及凋亡的相关机理。

5. 研究计划与进展

2月16日-2月28日 查相关资料,弄清楚实验的大体设计及流程。

3月01日-3月31日 学习培养癌细胞,并熟悉westrn blot、rt-pcr等相关技术 。

4月01日-4月31日 培养癌细胞,实验数据记录,分析实验数据,得出实验结果。

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