酿酒酵母中Exocyst复合体亚基Sec5对细胞自噬的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、课题研究的意义

细胞自噬（autophagy）是真核细胞中特有的一种机制，是细胞清除过多的或损坏了的蛋白质和细胞器的途径[1]。这一现象最早是由ashford和porter用电子显微镜在人的肝细胞中观察到[2] 。近10年来，人们对细胞自噬有了更深的了解。细胞自噬在进化过程中高度保守，从酵母、线虫、果蝇到脊椎动物和人都有参与细胞自噬的同源蛋白。研究表明，细胞自噬不仅对细胞在应激情况下（如饥饿、缺氧）的存活、程序性细胞死亡、抗原呈递以及细胞内病原体的清除有重要作用，而且对个体发育也至关重要[3-5] 。

2、国内外研究概况及应用前景

2. 研究的基本内容和问题

1、课题研究目标

确认sec3或sec5缺失突变体中所出现的自噬缺陷确实由相应的基因突变所引起。

2、研究内容

3. 研究的方法与方案

1、研究方法

1.1克隆目标基因片段并构建到高拷贝载体中

利用已知的目标基因两端的序列设计引物，从野生型酵母菌的基因组dna中，通过pcr技术可以获得目的基因，并将其克隆到prs423载体中。

4. 研究创新点

关于酿酒酵母中调控囊泡运输的Exocyst复合体中的Sec3和Sec5对细胞自噬的影响，这一研究内容至今未见报道。

5. 研究计划与进展

2014.3.12014.4.15

将sec3、sec5基因克隆到prs423载体中，并转入sec3与sec5突变体中。

2014.4.162014.5.1