1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一，目前乳腺癌在女性恶性肿瘤中占据第一的位置，发病率日益增高。大约 75% 的患者为激素受体 er-α 阳性的乳腺癌，随着乳腺癌个体化治疗的提出和完善，针对激素受体阳性的患者来说，内分泌治疗必不可少，并且能有较好的预后（傅韵与庄志刚，2013）。但是对于激素受体阴性（尤其是受体三阴性，er-/pr-/her2-）的患者来说，并不能从内分泌治疗中获益，且术后复发转移的风险相对提高。近年来，微小 rna( mircrorna，mirna) 在肿瘤中的研究越来越受关注，那么是否存在相应的 mirna 调控激素受体的表达，从而影响乳腺癌的转移途径呢?由于缺乏各种激素受体，乳腺癌中三阴性的乳腺肿瘤细胞的存在给乳腺癌的治疗带来了新的挑战。但是，最近关于mirna在乳腺癌中的作用的研究给乳腺癌的治疗带来了一丝的希望。本课题即是探索一种mirna即mir-206 对与乳腺肿瘤密切相关的信号通路notch通路的作用，进而找出其与乳腺肿瘤发生发展的初步关系。
已有研究发现，在肿瘤中存在notch、wnt、hedgehog等信号通路的不同程度的激活。在乳腺癌中，notch信号通路即存在不同程度的激活。乳腺癌的研究也早已进入分子水平,目前普遍认为诸多信号通路参与乳腺癌的发生发展,如ras和wnt等。近年来notch通路越来越受到关注。大量研究显示,notch信号通路是维持乳腺正常发育的关键调节因素。异常激活的notch信号通路导致转基因鼠乳腺恶性肿瘤的发生（李芳华与张新民，2011）。目前已知，notch信号广泛存在于大多数脊椎动物和无脊椎动物的不同组织中,notch家族成员较多,但结构高度保守。notch信号通路由受体、配体、下游基因及其他效应物等构成。已发现共有notch1/2/3/4四种受体、dll1/3/4及jagged1/2五种配体，下游效应物有has/hey等基因。notch在乳腺癌发生中的作用机制很复杂,目前多认为notch1、notch3、notch4对乳腺癌发生有促进作用,而对notch2到底是抑制肿瘤还是促进肿瘤形成尚无定论。
mir-206 作为mirna 家族中的一员，在骨骼肌再生以及细胞凋亡等方面起重要的作用，并且在众多肿瘤中均有表达，调控肿瘤细胞的增殖和侵袭。mir-206 是最早发现的与乳腺癌发生相关的mirna，并被认为和激素受体的调控有关（macquarrie kl等，2012）。已有研究表明，在肌肉瘤中过表达mir-206会抑制横纹肌肉瘤的细胞增殖，在神经胶质瘤和成神经细胞瘤中转染mir-206载体会诱导细胞凋亡，在hela细胞以及hpasmcs中过表达mir-206会使得notch3的表达量降低，这些已有的研究给了我们关于mir-206、notch以及乳腺肿瘤细胞三者之间的关系的启示。本课题即受此启发，探索mir-206表达水平与notch3的关系，进而初步找出其与乳腺肿瘤的联系，为治疗提供潜在的新靶标。
2. 研究的基本内容和问题
本课题主要以乳腺肿瘤细胞的多种细胞系为材料，通过检测MirRNA-206在各种细胞系中的表达情况，分析其与受体（主要是ER受体、HER受体）表达、Notch3表达的关系，预测其潜在的功能。拟解决的问题即为找出乳腺肿瘤细胞中Mir-206的可能的作用方式。
3. 研究的方法与方案
1）研究方法
首先建立起ER HER-、ER-HER 、ER-HER-的细胞系以及三阴性细胞系各两种，正常的乳腺上皮细胞系一种。然后，通过反转录获得Mir-206的cDNA，然后进行Q-PCR，对数据进行处理分析。同样的方式，再去检测各细胞系中Notch3的表达。将两者的表达情况以及受体的阴阳性相互联系起来，分析三者之间的关系，推出可能的Mir-206在乳腺肿瘤细胞中与Notch3
的关系。
2）技术路线与实验方案
MCF-7,SkBr3,BT-474,SUM149,SUM159,T-47D,HCC1954,MCF-10A八种细胞系的建立 |
提取MirRNA或mRNA |
分析结果 |
相对荧光定量PCR |
反转录Mir-206或Notch3 |
培养至密度大致一致，70~80%的密度，收集细胞 |
3）实验可行性分析
基于目前的实验平台与条件，整个实验的可行性较高，执行起来较容易。
4. 研究创新点
将Q-PCR用于快速检测MirRNA的表达水平。
5. 研究计划与进展
1）2月20日至3月1日，查阅相关文献；
2）3月1日至3月15日，建立起相关的细胞系；
3）3月16日至5月10日，进行主体实验；
