1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
人血管细胞粘附分子-1（human vascular cell adhesion molecule 1，human vcam-1）是一种重要的细胞粘附分子，主要表达在活化内皮细胞、上皮细胞、巨噬细胞、树突状细胞上，属于免疫球蛋白超家族（igsf）成员。其可以与整合素家族的α4β1或α4β7结合，参与淋巴细胞的活化和迁移及某些细胞的分化发育，在炎症、肿瘤转移、自身免疫性疾病、寄生虫感染等病理过程中也起重要作用[1]。
淋巴细胞在血液和各淋巴组织之间的动态循环对体内有效的免疫监视以及维持内环境的稳定起到重要作用。在归巢过程中，淋巴细胞首先在内皮细胞上缓慢滚动，随之紧密粘附，最后渗出血管，这些步骤是由趋化因子和整合素相互协调共同完成的[2]。趋化因子可通过胞内信号活化整合素，介导淋巴细胞的粘附作用，进而调节淋巴细胞向各个部位进行迁移。
整合素的构象根据其与配体亲和力的大小可分为低活性状态/中间活性状态/高活性状态。低活性状态的α4β7介导淋巴细胞在血管内皮细胞上滚动，高活性状态的α4β7介导淋巴细胞在血管内皮细胞上稳定粘附[3]。整合素与其配体的结合是一种动态可逆的过程，该过程是由整合素与其配体亲和力的动态调节决定的。作为一种淋巴细胞归巢受体，整合素α4β7与其配体vcam-1结合特异性介导淋巴细胞向外周淋巴结等部位的定向迁移。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：研究human VCAM-1 D1D2/D1D3/D1D4结构域与其功能完整性的关系。
拟解决为题:利用PCR技术扩增human VCAM-1 D1D2/D1D3/D1D4，并构建载体转染293T细胞，利用细胞上清纯化各个蛋白结构域，利用FlowChamber 检测各个结构域的粘附功能。
3. 研究的方法与方案
技术路线：
1、pcr扩增human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4结构域cdna片段
2、构建phl fc-his-human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4表达载体；
4. 研究创新点
本实验特色之处：
1、克隆出目的蛋白不同结构域的基因，表达蛋白结构域从而研究不同结构域与配体结合的关系，得出结构域功能完整性的特点。
2、目的基因连接fc-his标签后，再转染293t细胞，利用protein亲和柱特异结合fc片段的特性纯化蛋白。
5. 研究计划与进展
2月10号-3月10号：pcr扩增human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4结构域cdna片段构建phl fc-his-human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4表达载体；
3月中旬到4月中旬：转染293t细胞，human vcam-1/human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4结构域蛋白纯化，sds-page电泳检测human vcam-1/human vcam-1 d1d2蛋白表达；
4月下旬：利用flow chamber系统检测human vcam-1 d1d2/d1d3/d1d4结构域功能活性。
