1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic escherichia coli, etec）是可以导致人类和初生幼畜腹泻的重要病原体。
21世纪初，世界范围内有三十多亿人由大肠杆菌引发腹泻性疾病，大约有30~50万五岁以下儿童因此死亡[1]。
另一方面，初生幼畜被etec感染后,常因剧烈水样腹泻和迅速脱水而死亡,发病率和死亡率均很高,给养殖业带来严重的经济损失。
2. 研究的基本内容和问题
（一）研究目标：通过比较k88 etec感染ipec-j2细胞前后四个主要毒力因子（lt毒素，k88菌毛、鞭毛以及i型菌毛）在转录水平和蛋白表达方面含量的变化，为进一步阐释k88 etec在体内的致病过程提供理论基础。
（二）研究内容：本研究以k88 etec为研究对象，基于red同源重组技术构建etec k88ac△lacz缺失株。
1.通过lacz报告基因的方法和荧光定量的方法从转录水平检测elta基因（编码lt毒素a亚单位）、flhd基因（编码鞭毛系统一级调控子）、fima基因（编码i型菌毛主要结构亚基）和faeg基因（编码k88菌毛主要结构亚基） 在感染ipec-j2细胞前后含量的差异。
3. 研究的方法与方案
1.利用red同源重组的方法构建etec k88ac△lacz缺失株。
2.pcr扩增elta、flhd、fima和faeg基因并连入peasy-t1 simple载体上。
3.利用限制性内切酶ecor i和bamhi将上述启动子切下插入到prs551的lacz基因上游，通过电转化法构建报告质粒。
4. 研究创新点
首次从感染细胞与否的角度比较k88ac etec四个主要毒力因子表达含量的变化，为深入阐述etec致病机理提供了理论依据。
荧光定量方法已经普及，但lacz报告技术一样可以高效准确地检测目的基因的表达量。
通过本次实验，可以验证lacz报告技术检测是否能够成为一种廉价高效的替代方案。
5. 研究计划与进展
研究总体安排：2015年9月-2016年5月进度安排为：2015年 9月-2015年10月：完成缺失株的构建和ipec-j2细胞的复苏培养。
2015年10月-2015年12月：完成lacz报告技术的检测。
2015年12月-2016年 1月：完成荧光定量pcr的检测。
