植物中乙酰胆碱酯酶的提取工艺研究开题报告

1. 研究目的与意义

植物酯酶源丰富，取材方便，制备简单，可利用植物酶的抑制技术测定果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药。但总酯酶灵敏度不够，检测效果不理想。本文研究其中的提取液种类、浓度、提取温度、提取时间对乙酰胆碱酯酶活性的影响，通过试验确定其最佳提取工艺，为酶提取、分离和纯化方法的建立打下基础。旨在为农药残留快速检测提供配套的新酶原，降低检测成本 ,更重要的意义在于解决植物酶原在农药残留检测中灵敏度低的问题。

2. 国内外研究现状分析

国内外对乙酰胆碱研究有很多，有的以马拉氧磷和异马拉硫磷为研究对象，采用双因子方差分析法研究马，拉氧磷和异马拉硫磷对映体在不同比例混合下对乙酰胆碱脂酶的联合作用。有的从蚯蚓中提取乙酰胆碱脂酶,通过硫酸铵盐析,离子交换层析等方法获得了较纯的胆碱酯酶,并对其部分性质进行测定，分别采用鸡蛋膜固定化法,活化载体-共价结合法和戊二醛交联法进行酶的固定。目前研究主要集中在从昆虫体内提取乙酰胆碱酯酶,而且国内外也进行了大量的研究。但是来源不如植物方便廉价。

3. 研究的基本内容与计划

1）通过单因素实验确定提取温度，提取时间和提取液种类和ph对小麦植物中乙酰胆碱酯酶活性的影响。

（2）用提取的植物中乙酰胆碱酯酶做提纯实验。

2012.3-2012.4文献检索，资料准备，开题报告及探索性实验

4. 研究创新点

1.通过单因素实验筛选出影响植物中乙酰胆碱酯酶活性的重要因素，选择最佳提纯条件。

2.从不同层面综合考察植物中乙酰胆碱酯酶的萃取率：如aot，ctab，sds等不同方式的萃取酯酶，测定其萃取活性及其效率。

3，通过对萃取液蛋白质含量的测定，间接反映萃取效率。