去除胞外多聚物(EPS)对假单胞菌接合效率的影响开题报告

 2022-01-21 21:52:50

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

假单胞菌属(pseudomonas sp.)是假单胞菌科的一属,属于γ-变形菌纲,是分布最广的微生物之一。

随着基因组工程的发展,完成全基因组测序的假单胞菌种类越来越多,预测的次级代谢产物种类比较丰富,其中恶臭假单胞菌(pseudomonasputida),铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginoda),荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)和丁香假单胞菌(pseudomonas syringae)是常见的几种假单胞菌【1】。

在生物转化领域,假单胞菌也具有一定优势。

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2. 研究的基本内容和问题

目标:去除假单胞菌的胞外多聚物,并将目标基因通过接合反应转移到假单胞菌内,探求去除胞外多聚物对假单胞菌接合效率的影响 内容:选定一种常用、低害的假单胞菌菌种进行培养。

养成后分组进行实验,保留一部分用于再次接种培养,其余部分分为两组,一组去除胞外多聚物,培养其进入感受态,进行接合反应,然后通过抗生素筛选目标菌株,获得转化效率数据;一组不去除胞外多聚物,培养进入感受态之后直接进行接合反应。

比较两类操作接合效率的差异。

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3. 研究的方法与方案

1.拟采取的研究方法 (1)挑选菌种,培育单菌落;(2)区分菌体本体与胞外多聚物;(3)采用物理提取法(超声波法、超声离心法蒸汽提取)或化学试剂法(naoh提取、乙醇提取、edta提取、阳离子交换树脂等)去除胞外多聚物;(4)将所选菌种细胞转化成感受态细胞;(5)将目标基因(质粒等)通过接合法(三亲接合)转移到菌体内;(6)检测目标基因在菌体内表达的比例。

去除胞外多聚物的与不去除的进行对比;(7)改变其他实验条件(ph、温度等)重复实验并检测结果。

2. 技术路线假单胞菌单菌落---去除胞外多聚物---筛选目标基因---目标基因通过接合反应转入假单胞菌---检测目标基因接合效率---改变条件多次重复实验---数据整理得出结论3. 可行性分析 (1)选题上 假单胞菌是良好的实验菌种,且其在工业上也有较大用途,试验所得结果或可推广使用。

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4. 研究创新点

假单胞菌获取方便,适应性强,种类多,营养类型多样,可接受形式多样的目标基因,亦有各类的菌属可供实验,本课题的研究结果有较好的预期。

本课题的研究又与通常的研究方向不同,在不抛弃外部环境的影响下,直接探求菌体与环境接触的eps所构成的小环境对基因重组的影响,可与其他研究成果互为补充。

已有对假单胞菌降解有机物的大量研究,且未有研究表明去除胞外多聚物对假单胞菌接受外来遗传物质有何影响,本研究成果或许能为假单胞菌降解有机污染物等提供帮助。

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5. 研究计划与进展

2018年1月-2018年2月 文献的阅读; 2018年2月-2018年4月 开展实验,记录数据; 2018年4月-2018年5月 整理分析实验结果,提交结题报告。

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