金桂芳樟醇合成酶的克隆表达及纯化研究开题报告

1. 研究目的与意义

来源于阔叶薰衣草的芳樟醇合成酶是合成单萜芳樟醇的酶，具有较好的应用价值。该酶来源于植物，在大肠杆菌中的表达需要优化。本研究拟全合成该酶基因，并优化其核酸序列，构建重组质粒，并采用低温诱导、伴侣蛋白、linker等方法优化该基因在大肠杆菌中的表达，获得最佳组合，并将获得的重组蛋白进行纯化和定性。

2. 国内外研究现状分析

国内内蒙古农业大学对芳樟醇合成酶基因克隆中进行了引物设计，TRlzol法提取薰衣草总RNA，使用RCR技术获得薰衣草的cDNA,随后进行Llis片段扩增，将目的片段与质粒链接构建表达载体，再将表达载体转入大肠杆菌中进行表达。

国外研究进展: 日本Shizuoka大学鉴定了与来自柠檬香桃木的芳樟醇合成酶具有序列相似性的cDNA，并根据制造商的说明从柠檬香桃木幼叶制备总RNA，获得了cDNA,根据先前克隆的植物单萜合酶的氨基酸序列设计引物,将扩增的cDNA片段插入质粒中，再将构建的质粒导入大肠杆菌中进行表达，结果表明基因在大肠杆菌中的功能性表达产生了能够催化二磷酸香叶酯转化为（β） - 芳樟醇，即无环单萜醇，并转化为较少量的环单萜烯的活性酶。

3. 研究的基本内容与计划

【内容】：

（1）质粒dna的小量制备：提取表达载体

（2）质粒dna电泳鉴定

（3）质粒dna的酶切

4. 研究创新点

本课题拟优化芳樟醇合成酶的DNA片段，以优化其左旋芳樟醇的产率。