C,N端组氨酸标签对细菌铁蛋白结构稳定性及其自组装的影响开题报告

1. 研究目的与意义

铁蛋白是普遍存在于微生物和动植物体内的一种高效贮铁的蛋白质。

具有调节铁代谢平衡、疾病诊断和辅助治疗、新功能不断开发等作用，因而具有很大的研究价值。

本次实验旨在对蛋白的自组装作理论上的研究，探究在n端加入组氨酸标签（his-tag）对铁蛋白结构稳定性及其自组装的影响。

2. 国内外研究现状分析

近十几年来，在铁蛋白生理功能和铁代谢途径方面的研究获得一系列具有科学价值的理论和应用成果，在蛋白壳的结构方面更为显著[4]．Hempstead P D[5]等在1.9埃的高分辨率下研究了重组人H链和马L。

链同源多聚体的三维结构，发现二者结构非常相似．Park等[6]用高分辨率双向凝胶电泳技术分离人类铁蛋白轻链亚基，用胰蛋白酶消化技术和MALDl2TOF质谱技术研究该轻链亚基的肽指纹图谱，用于轻链亚基的部分一级结构分析。

3. 研究的基本内容与计划

利用另一种载体，其c端含有组氨酸，且并没有较多的干扰片段，那么我们可以利用分子生物学手段，人为在n端加入组氨酸标签，从而可以考量出n端组氨酸对于蛋白质的自组装过程的影响。

由于实验室的pet-20b载体正符合我们所需要求，且为实验室成熟的操作系统，因此本实验将会将通过科学设计，对细菌铁蛋白n端的组氨酸进行研究。

第一阶段：利用基因工程原理科学的设计，在铁蛋白c端和n端分别加入6个组氨酸标签，最终得到重组的铁蛋白。

4. 研究创新点

设计在铁蛋白C端和N端分别加入6个组氨酸，得到重组的铁蛋白，利用CD圆二色谱，FPLC蛋白纯化系统对重组蛋白质的聚合态及蛋白二级结构和动力学稳定性进行检测。