基于脚手架蛋白dockerin和cohesin模块的相互关系研究开题报告

1. 研究目的与意义

本论文拟进行基于脚手架蛋白dockerin和cohesin模块的相互关系研究，形成锚定有甘油脱氢酶等的多酶催化体系，用于催化制备DHA，高效便捷。

本论文构建的脚手架蛋白结构可应用于多酶共展示体系，将极大地推动脚手架蛋白在工业催化领域的发展。

2. 国内外研究现状分析

赵团队使用合成酵母复合体实现功能性纤维小体的表面共展示技术用于催化纤维素水解生产乙醇。

3. 研究的基本内容与计划

本研究在前期工作中，成功构建来源于热纤梭菌纤维小体的dockerin部分在大肠杆菌中的重组质粒pet-20b-dockerin和pet-20b-cohesin，并且成功在大肠杆菌bl21中成功表达。基于脚手架蛋白dockerin和cohesin模块之间的蛋白质相互作用。

本论文拟进行基于纤维小体脚手架蛋白的构建。构建甘油脱氢酶-dockerin的重组质粒，同时在大肠杆菌中表达cohesin模块蛋白和甘油脱氢酶-dockerin蛋白，并进行对接，并对dockerin与cohesin两模块之间的蛋白质相互作用条件进行探究，通过快速蛋白质色谱(fplc)等现代分析分离技术，确定胞外相互作用的最佳条件，并测定相关参数。

研究主要步骤：1.构建重组质粒pet-20b-gld-dockerin。

2.重组质粒pet-20b-gld-dockerin的诱导表达。

4. 研究创新点

本论文构建的脚手架蛋白结构可应用于多酶共展示体系，对比于单一的表面展示技术，具有外源蛋白可更换性、多重性（可以有多种外源蛋白），这将极大地推动脚手架蛋白在工业催化领域的发展。