1. 研究目的与意义
随着分子生物学和基因工程技术的迅速发展和广泛应用,人们根据自己的意愿有目的、有计划、有根据、有预见地将外源基因导入动物细胞内,使外源基因进行表达,将生物性状传递给子代动物。
绿色荧光蛋白基因所产生的蛋白质在蓝色波长范围的光线激发下会发出绿色荧光。
在生物学研究中,科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体标记。
2. 国内外研究现状分析
1962年 下村修和约翰森等在《细胞和比较生理学杂志》上报道,他们分离纯化了水母中发光蛋白水母素, 该文章有个注脚,说还发现了另一种蛋白,他在阳光下呈绿色,钨丝下呈黄色,紫外光下发强烈绿 1974年 他们纯化得到了这个蛋白,当时称为绿色蛋白。
1985年 日本科学家普腊石和日裔科学家satoshi inouye拿到了水母素的基因。
1992年 普腊石拿到了gfp的基因。
3. 研究的基本内容与计划
研究内容:绿色荧光蛋白基因GPF的克隆表达及其纯化确定其荧光的激发波长、发射波长、荧光效率等基本参数考察影响GFP荧光信号的理化因素研究计划:(2014年2月17日至2014年5月下旬)第一周:2月17日~2月23日 阅读相关文献,了解掌握基础知识,并重温实验室操作注意事项;第二周:2月24日~3月02日 重组质粒载体的构建和转化;第三周:3月03日~3月09日 优化重组质粒在大肠杆菌中的表达条件;第四周:3月10日~3月16日 纯化GFP蛋白,并探究其纯化条件;第五周:3月17日~3月23日 测定GFP蛋白的激发波长、发射波长、荧光效率等基本参数;第六周:3月24日~3月30日 配制不同浓度的GFP蛋白,并绘制GFP与荧光值的标准曲线;第七周~第九周:4月01日~4月20日 考察涉及GFP荧光信号的理化因素,并探究这些因素对其荧光效率 的影响;第十周:4月21日~4月27日 整理数据和图表;第十一周:劳动节假期;第十二周:5月05日~5月11日 论文框架的构思以及文献综述;第十三周~5月下旬:论文撰写。
4. 研究创新点
通过绿色荧光蛋白反应外源基因的表达情况,简单方便针对分泌蛋白,系统研究影响GFP荧光信号的理化因素
