来源于巨大芽孢杆菌ALA2的细胞色素P450BM-3的蛋白质工程研究开题报告

1. 研究目的与意义

目的：运用定点突变手段对细胞色素P450BM-3进行改造，并和原始基因在大肠杆菌中表达情况进行对比，找出影响该酶表达量和表达活力的主要因素。

意义：为进一步探索细胞色素P450BM-3进行体外生物催化应用打下较好的基础。

2. 国内外研究现状分析

目前许多加氧酶已经被人们开发利用于催化生物转化，随着关于生物转化及合成的基础科学不断的进步，工程加氧酶在用于整个细胞系统的代谢的方面的应用也越来越多。国内外均已有细胞色素P450酶系相关方面的研究及相关文献资料报道，加氧酶蛋白质工程的研究进一步促进了化学合成和催化生物转化领域的发展。

3. 研究的基本内容与计划

内容：本研究拟采用来源于巨大芽孢杆菌ala2的细胞色素p450bm-3基因进行蛋白质工程设计，按此依据进行定点突变和重组表达，并和原始基因在大肠杆菌中表达情况进行对比，找出影响该酶表达量和表达活力的主要因素。为进一步探索体外合成的细胞色素p450bm-3进行生物催化应用打下较好的基础。

计划：

2011.02.21~2011.02.27查阅文献，了解实验背景及原理

4. 研究创新点

本研究拟采用比哺乳动物或植物细胞活性高得多的巨大芽孢杆菌CYPs进行定向突变，采用一步反向PCR技术进行DNA扩增，选择繁殖周期短的大肠杆菌作为感受态细胞进行DNA重组表达，筛选出酶活增强的突变酶。本研究在药物开发，生物降解和生物催化过程具有十分重要的意义，加氧酶的应用也具有广泛的市场前景。