1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
旋毛虫病是由旋毛虫引发呈全球性分布的食源性人兽共患寄生虫病,动物通过摄取感染旋毛虫肌幼虫的肉类而感染,常见症状为全身发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐、肌肉痛、甚至心肌炎和脑炎[1]。自1835年首次发现以来,旋毛虫经常引起突发性重大公共卫生事件,是世界各国屠宰动物首检和强制性必检的人兽共患病种,也是目前世界范围内投入防控费用比较高的食源性人兽共患寄生虫病之一。目前,加强对该病的检验与诊断是防控该病的最有效途径[2,3]。
研究发现,动物的睾酮、雌二醇和孕酮通过各自的类固醇受体传递信号,影响免疫细胞的功能,对寄生虫、细菌和病毒感染产生不同的易感性[4]。孕酮受体(progesterone receptor,pr)是孕酮发挥作用的关键分子,在生殖周期和妊娠过程中控制发育、增殖和分化[5]。
aguilar-díaz 等[6]在对猪带绦虫和囊尾蚴的研究中发现一种新的孕酮受体膜成分(progesterone receptor membrane component,pgrmc)。该种蛋白位于囊尾蚴的皮下组织,利用测序蛋白进行计算机分子模拟发现pgrmc具有潜在的结合甾体激素的能力。孕酮可以通过pgrmc结合直接作用于囊尾蚴。escobedo等[7]检测猪带绦虫的孕酮受体相关序列,发现,其与与鱼类和两栖动物的孕酮受体高度相关,而与鸟类和哺乳动物的亲缘性的亲缘关系较差远。此外研究还发现孕酮能促进猪带绦虫囊尾蚴头节外翻和虫体生长,而孕酮的拮抗剂ru486能永久性阻断囊尾蚴头节的外翻,提示ru486具有成为一种新的抗猪带绦虫药的潜能。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标、内容
提取旋毛虫肌幼虫rna,对其孕酮受体基因进行克隆和原核表达。
2. 拟解决的关键问题
3. 研究的方法与方案
1.研究方法:
(1)总rna提取和cdna的合成:提取旋毛虫肌幼虫的rna,使用微量核酸测定仪检测rna浓度,通过1%琼脂糖凝胶电泳检测其质量,并将rna反转录合成cdna,存于-20℃备用。(注:由于rna易于降解,所以为了延长保存时间和确保质量需在提出取rna后立即进行反转录制备cdna。考虑到后面的实验步骤需要大量rna,所以在这一步可以多提取一些以提高实验效率。)
(2)旋毛虫孕酮受体基因的克隆:根据ncbi提交的相近物种的孕酮受体基因序列设计引物,以cdna作为模板进行pcr扩增出孕酮受体基因,测定pcr产物的基因序列。(注:在设计引物时,根据引物设计原则选择多对后备引物,进行试验性pcr选择最合适的引物。在进行pcr过程中探索pcr条件,以求扩增出的孕酮受体基因浓度高、条带单一、结果稳定。)
4. 研究创新点
本实验首次尝试对旋毛虫肌幼虫的孕酮受体进行克隆和表达,以期获得孕酮受体的基因序列。
5. 研究计划与进展
1. 研究计划:
由于开学时间还未定,故此处的研究计划我只列举课题的完成所预计需要的时长。
(1) 收集相关文献资料,申报课题,撰写文献综述-——2月(在家完成);
