1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、本课题意义
长链非编码rna（long noncoding rna, lncrna）作为非编码rna家族的重要成员，近年来逐渐成为研究热点。它参与调控细胞的增殖分化、个体发育以及各种疾病的发生，且在哺乳动物生殖领域发挥着关键作用。lncrna能够调节哺乳动物生殖系统的分化发育与生理功能，还可调节下丘脑和垂体的生长发育，进而影响整个下丘脑-垂体-性腺轴。
hsd17b12作为17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-hsd）中的一员，参与调节类固醇的产生，并在类固醇激素合成通路上富集。有研究证明，hsd17b12可将雌酮（e1）、雄烯二酮分别转化为雌二醇（e2）和睾酮，与生殖系统发育等有关，参与哺乳动物生殖功能的调控。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标
以雄性湖羊垂体为研究对象，对 lncrna tcons_00066406和hsd17b12进行简单生物信息学分析，比较其基因组信息和序列关系；通过组织水平的特异性检测和蛋白定位观察其表达特异性；分离并鉴定湖羊垂体细胞，在细胞水平对lncrna tcons_00066406进行干扰，检测其预测靶基因hsd17b12和垂体功能相关基因水平变化。
3. 研究的方法与方案
一、研究方法
主要的研究方法如下：
（1）生物信息学分析进行序列对比；
4. 研究创新点
根据现有研究，lncrna和相关靶基因对垂体功能的影响以及调控机制还了解较少，且hsd17b12相关的研究内容也主要集中于生殖器官中，未涉及垂体组织。lncrna的研究对象也较少涉及湖羊等家畜。目前尚未有湖羊的垂体组织中lncrna tcons_00066406和预测靶基因hsd17b12的相关研究。
本课题的特色和创新之处还包括：
（1）检测了lncrna tcons_00066406和预测靶基因hsd17b12之间的序列关系和基因组信息，并验证了两者间是否存在靶向关系。
5. 研究计划与进展
| 时间计划 | 研究计划及预期进展 |
| 第一阶段 2019.05— 2019.08 | 收集、查阅、整理相关文献资料；确定实验所需知识储备和相应材料的准备；学习相关实验知识及技术；在老师指导下指定研究计划。 |
| 第二阶段 2019.09 —2019.10 | 采集湖羊垂体组织以及其它各部分组织，获得并鉴定出垂体细胞，进行垂体细胞的培养；根据测序所得的lncRNA TCONS_00066406完整序列合成siRNA；根据NCBI涉及引物序列并合成相关引物；完成细胞部分的干扰实验。 |
| 第三阶段 2019.11-2019.12 | 研究lncRNA TCONS_00066406和预测靶基因HSD17B12在湖羊不同组织中的表达模式以及生物学信息；并通过免疫组化进行蛋白定位。 |
| 第四阶段 2020.01-2020.04 | 用qRT-PCR测出siRNA干扰后下游靶基因HSD17B12和垂体功能相关基因FSH、LH的mRNA表达水平变化情况；测定干扰lncRNA TCONS_00066406对HSD17B12等蛋白表达的影响。 |
| 第五阶段 2019.04-2019.05 | 将所有实验数据进行统一整理、分析；撰写文章，办理有关结题事项。 |
预期研究结果：
（1）通过生信分析和序列比对阐明lncRNA TCONS_00066406和预测靶基因HSD17B12之间序列关系。
（2）获得lncRNA TCONS_00066406和预测靶基因HSD17B12在湖羊不同组织的表达谱。
（3）获得HSD17B12在垂体中的定位。
（4）得到有效干扰的siRNA，通过干扰lncRNA TCONS_00066406阐明其对靶基因HSD17B12和垂体功能相关基因FSH、LH的影响。
