猫杯状病毒VP1蛋白截短片段的原核表达及多抗制备开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猫杯状病毒（feline calicivirus, fcv）是一种可感染猫的无囊膜单股正链rna病毒，基因组大小为7.7kb，是杯状病毒科（caliciviridae）、水疮性病毒属（vesivirus）的成员之一，发病典型症状为上呼吸道症状和口腔溃疡，也可引起猫发热、胃肠炎、肺炎、跛行、流产等[1, 2]。

fcv不仅可感染猫，也可感染狮、虎、豹等猫科动物。

fcv具有较高的变异性，强毒力的毒株引起的系统性疾病（virulent systemic disease, vsd）有较高的死亡率，在多个国家流行[2-4]。

2. 研究的基本内容和问题

本项目拟进行猫杯状病毒主要衣壳蛋白VP1的截短片段F的原核表达并制备兔抗F多抗，检测F蛋白的抗原性。

研究内容如下：1. 猫杯状病毒F截短蛋白基因片段的扩增2. 重组质粒的构建3. 重组蛋白的表达4. 重组蛋白的纯化5. 兔抗F蛋白多克隆抗体的制备6. Western blot对兔抗F蛋白多抗的生物活性检测拟解决的关键问题为：F蛋白的原核表达，兔抗F血清多抗的制备，F蛋白抗原性的检测。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1. 猫杯状病毒f截短蛋白基因片段的扩增根据fcv衣壳蛋白vp1截短片段f的基因序列设计特异性引物，引物序列为: f:5-attgagctcctgggttacacaggaattggt-3,下划线为sac i酶切位点，r:5- atactcgagtcataattttgtcatactact -3，下划线为xho i酶切位点。

pcr扩增目的基因片段。

pcr产物经琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下切下含目的条带的琼脂糖凝胶块，用dna快速回收纯化试剂盒回收凝胶中的目的片段。

4. 研究创新点

市场上预防fcv感染的疫苗多为弱毒苗或灭活苗，暂无亚单位疫苗。

而亚单位疫苗具有无散毒风险，较为安全，且可区别自然感染与免疫保护等优势，具有开发利用的前景。

f蛋白据报道为fcv的抗原优势蛋白，基于f蛋白的亚单位疫苗的研制将有助于防控fcv。

5. 研究计划与进展

研究计划：2017年9月~2017年10月原核表达并纯化重组F蛋白2017年10月~2017年12月 制备兔抗F蛋白多抗、效价检测及western blot检测预期进展：1. 成功表达并纯化出重组F蛋白；2. 制备出兔抗F蛋白多抗并完成效价检测及western blot检测