1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.本课题的意义噬菌体在二十世纪早期由twort(1915)和dherelle(1917)先后发现,是感染细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一种病毒,亦称细菌病毒。
根据与寄主细菌的相互关系大致可分为溶菌反应和溶原化反应两种类型。
凡是能使寄主细胞迅速裂解引起溶菌反应的噬菌体,称为毒性噬菌体或烈性噬菌体。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究的目标本研究拟通过同源重组的方法,在溶源菌基因组中,将一种噬菌体编码尾丝蛋白特异性区域的基因交换给另一种噬菌体,观察交换前后噬菌体的宿主谱及裂解能力有无变化,以筛选出可以用于增广噬菌体宿主谱的特异性基因。
为研制噬菌体制剂提供可靠的基础研究。
2.研究的内容1)实验室前期筛选到两株可诱导的溶源噬菌体,分别为p88和pro147,在ncbi中序列号为,并证明p88尾丝蛋白氨基酸序列716-746为关键宿主谱决定区。
3. 研究的方法与方案
1.研究方法1)实验室前期筛选到两株可诱导的溶源噬菌体,分别为p88和pro147,在ncbi中序列号为,并证明p88尾丝蛋白氨基酸序列716-746为关键宿主谱决定区。
2)通过生物信息学软件blast比对p88关键宿主谱决定区716-746与pro147对应区域。
对不同的氨基酸位点进行分析,筛选两个进行后续替换实验。
4. 研究创新点
1)在前期实验中,综合运用基因组学,以及高通量测序技术。
2)噬菌体p88和pro147的宿主谱测定需要大量的菌株支持,本研究采用实验室保有的150多株菌株进行测定,数据较为全面可靠。
3)利用同源重组的操作方法来改造大肠杆菌噬菌体尾丝蛋白尚未有报道。
5. 研究计划与进展
1)第一阶段:完成生物信息学工作,在网上查阅所要研究的噬菌体全基因组序列,利用生物信息学软件分析比对要研究的内容。
2)第二阶段:构建同源重组载体,完成噬菌体尾丝蛋白的改造,测定宿主谱的变化以及裂解能力的变化。
第三阶段:撰写论文。
