茉莉酸对盐胁迫小麦生长的影响开题报告

1.茉莉酸对盐胁迫小麦种子萌发的影响

将小麦种子用蒸馏水洗，选取籽粒饱满的小麦种子,以75%酒精表面消毒10min,试验共设6个处理：以蒸馏水作为对照组（CK），盐胁迫处理浓度分别设置为0，0.7%，1.0%，1.3%和1.6%（T1、T2、T3、T4、T5）。将小麦种子用JA溶液浸种24h，CK用等量蒸馏水浸种处理，将浸种后的种子在不同处理浓度NaCl溶液中进行发芽试验，CK组在等量的蒸馏水中进行发芽试验。采用纸上发芽床法，在洗净、烘干的培养皿中铺上适量脱脂棉，将处理溶液分别加入培养皿内，然后整齐排入30粒种子，加盖。在25℃的恒温培养箱内，在黑暗中发芽。每个处理重复3次。称重法补充蒸发的水分，保持溶液的浓度恒定。在发芽试验第7天应用计数法分别查出每个培养皿中小麦萌发的个数（以芽长超过种子长度的1/2为发芽标准），计算发芽率。

2.茉莉酸对盐胁迫小麦幼苗的影响

小麦发芽后，当幼苗长至两片真叶时,选取生长一致的健壮幼苗使用JA处理。试验共设6个处理：以蒸馏水作为对照（CK），NaCl溶液处理浓度分别设置为0，0.7%，1.0%，1.3%和1.6%（T1、T2、T3、T4、T5）。2天后叶面喷施JA强化处理，每处理喷施60 mL。CK用等量蒸馏水代替。强化处理后3天，每隔3天浇1次营养液，胁迫处理15天后测定相关生理生化指标。

3.SOD活性测定——邻苯三酚自氧化法

超氧化物歧化酶(SOD)是一种含金属离子的保护酶。主要功能是催化超氧物阴离子自由基(O2﹣)发生歧化反应,生成H2O2和O2,从而清除O2﹣对细胞的毒害。用测定SOD活性。

步骤：

①SOD提取： 称取0.5g小麦叶片，加入6ml磷酸缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，在3℃下12000r/min离心20min后，取上清液，64℃水浴中热击20min，再置于16℃下，5000r/min离心15min，取上清液即为SOD提取液。

②邻苯三酚自氧化速率测定：取5mlTris-HCl缓冲液，25℃水浴20min，加入20μl邻苯三酚试剂，于325nm下测其OD值，每30s记一次，记录3min，计算每分钟的变化速率,记为Ao。

③样品的测定：取5mlTris-Hcl缓冲液，加入20μlSOD提取液，置25℃水浴20min，加入20μl邻苯三酚试剂，325nm下测其OD值，每30s打印依一次，记录3min，计算每分钟的变化速率，记为As。

④结果计算

SOD酶活性（U/ml）=

公式中:V——加样体积（实验中为20μl）

n——样品稀释倍数（实验中稀释250倍）

0.5——抑制自氧化反应速率的50%

⑤将结果记录于表中：

⑥结果分析

4.MDA含量测定——硫代巴比妥酸法

步骤：

①MDA的提取：称取0.5g小麦幼苗叶片,加入1mL10%三氯乙酸(TCA)和少量石英砂研磨，再加入4mL三氯乙酸充分研磨,将匀浆液转入离心管,于4000r/min离心10min,上清液即为MDA提取液。

②显色反应及测定：吸取2mL提取液，加入2mL0.6%TBA液，混匀，在试管上加盖塞，置于沸水浴中沸煮15min,迅速冷却，离心。取上清液测定532nm和450nm处的OD值，对照管以2mL水代替提取液。

③结果计算：

CMDA（μmol/L）=6.45A532－0.56A450

公式中：A450——450nm波长下测得的吸光度值

A532——532nm波长下测得的吸光度值

CMDA——反应混合液中MDA的浓度。

提取液中MDA浓度（μmol/L）=

MDA含量（μmol/g）=

④将结果记录于表中

⑤结果分析

5.叶绿素含量测定——用叶绿素计测定

步骤：

① 叶绿素测定的整个实验过程中，需要用叶绿素计测定不同小麦叶片的同一片区域，本实验选择在距小麦幼苗叶尖2~3cm处测定。每个平行对照组选择不同的叶片测10~15次叶绿素含量，求平均值作为一个数据，每组做3个平行。

②将结果记录于表中

③结果分析

6.脯氨酸（Pro）含量测定

步骤：

①脯氨酸提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置大管中，然后向各管分别加入5ml3％的磺基水杨酸溶液，研磨提取，匀浆移至离心管中，在在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后3000r/min离心10min，取上清液待测。

②标准曲线制作：用100μg/ml脯氨酸配制成0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/mL的标准溶液。取标准溶液各2mL,加2mL3%磺基水杨酸，2mL冰醋酸和4mL2.5%酸性茚三酮试剂于具塞试管中，置沸水浴中显色1h,冷却后加入4mL甲苯，盖好盖子于漩涡混合仪上振荡0.5min,静置分层，吸取红色甲苯相，波长520nm处测定OD值，以OD值为纵坐标，脯氨酸质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。

③各取2mL上清液，分别加入2mL蒸馏水，冰醋酸和4mL2.5%酸性茚三酮，与上述制作标准曲线一样进行显色，萃取和比色，最后从标准曲线查得脯氨酸含量。

④将结果记录于表中

⑤结果分析

7.可溶性糖含量的测定——蒽酮比色法

步骤：

①标准曲线制作。

②可溶性糖提取：称取0.3g新鲜小麦叶片，剪碎混匀，放入具塞试管中，加入10ml蒸馏水，在沸水浴浸提30min，将提取液过滤入25ml容量瓶，再加入10ml蒸馏水，沸水浴浸提30min，提取液过滤入同一25ml容量瓶，最后漂洗，定容至刻度。

③显色：取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水，0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml浓硫酸，振荡后，立即沸水浴，逐管保温1min，自然冷却至室温，在630nm处测吸光度，记录数据。

④ 结果计算

最后通过标准曲线求出可溶性糖的含量（μg），按下方公式计算出被测小麦幼苗叶片的糖含量：

可溶性糖含量（%）=

公式中：C——标准曲线上求得的糖含量（μg）

V总——提取液总体积（ml）

V测——吸取样品液的体积（ml）

N——稀释倍数

W——样品鲜重（g）

⑤将结果记录于表中

⑥结果分析