1. 研究目的与意义
研究背景:
普遍的应激蛋白(universal stress protein, usp):生物或细胞在非生理条件下,为了应答外来的刺激而表达的蛋白质。目前研究得最多的是热激蛋白。热激蛋白:在高于正常生长温度刺激下,诱导合成的新蛋白。其功能:防止蛋白质变性。使其恢复原有的空间构象和生物活性
关于真核生物中热激蛋白的研究报道多一点。热激蛋白是1962年rittossa在研究果蝇唾液腺时发现的。它是生物体在受环境胁迫时产生并藉此防止细胞免受胁迫和修复正在遭受的胁迫伤害。近年来,热激蛋白的研究已取得重大进展,成为生命科学研究中较为活跃而且发展迅速的课题之一。研究人员通过对人类机体中发现的一种特殊蛋白进行研究,或可帮助开发出治疗癌症及神经变性疾病的新型疗法。此前研究发现,名为热激蛋白90(hsp90)的修饰形式或可诱导神经变性障碍患者机体的神经系统中的死亡细胞;而如今研究者却发现,hsp90并不会对所有的细胞进行一样的处理,实际上,杀灭某些细胞的相同的蛋白质或许会帮助癌细胞。
2. 研究内容和预期目标
研究内容:
本论文主要内容是克隆并表达联苯降解基因簇的应激蛋白。包括:
1.设计引物,利用基因组dna进行pcr,同时提取质粒pet-28a( )。
3. 研究的方法与步骤
研究方法:
利用表达宿主e.colibl21(de3),表达载体pet-28a( )和his6-tag来表达usp。
步骤包括:
4. 参考文献
[1] 曲凌云, 孙修勤, 相建海,等. 热休克蛋白研究进展[j]. 海洋科学进展, 2004, 22(3):385-391.
[2] 王海鸿, 雷仲仁. 昆虫热休克蛋白的研究进展[j]. 中国农业科学, 2005, 38(10):2023-2034.
[3] 钟文英, 普雄明. 热休克蛋白的分子生物学研究进展[j]. 医学综述, 2005, 11(2):148-150.
5. 计划与进度安排
1. 01—03周 查阅相关文献资料完成开题报告
2. 04—07周 设计实验方案,做好实验前准备,包括设计引物,购买相关的分子试剂盒,制备大肠杆菌感受态等。
3. 07—12周 进行实验,包括pcr,酶切,连接,转化,挑阳性克隆,送测序,转化表达宿主,诱导,进行表达检测等。
