BphD的克隆与表达开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景:

多环芳烃指的是分子中带有两个或以上苯环的碳氢化合物，在煤、石油、有机高分子化合物等有机物进行不完全燃烧时产生的挥发性碳氢化合物，广泛存在于水体、大气、土壤、生物体中^[1]。并且它们具有致畸、致癌、致突变毒性及环境激素毒性，如何解决它们的存在或减少它们的存在已经成了一个重大问题。这些化合物最终会通过微生物的降解作用被矿化。因此对多环芳烃降解菌的筛选以及微生物对芳香化合物的降解机制研究对于促进环境修复的进程具有重大意义。

之前人们已经进行了微生物代谢芳香化合物的研究，但是，微生物代谢异质化合物这一过程中仍有一些问题需要我们重视并进行解决：第一是中间产物的积累问题，由于某些代谢过程非常复杂，产生了大量中间产物，导致微生物转化芳香底物能力变得有限，产生羟基化的底物，环裂解化合物等终产物，这些化合物都会导致环境的二次污染；第二是被混合芳香物污染的环境修复难的问题，目前，虽然人类各项生产技术不断提高，但芳香化合物污染问题日益严重，被污染的环境被人们越发频繁的检测到，以往人们只研究了利用模式化合物生长的菌株对模式化合物衍生物的降解性能，忽视了环境中共存的其它芳香化合物；第三，一些有机溶剂往往存在于石油或者工业废水中，这些有机溶剂能够导致细胞的死亡，从而严重延缓环境修复过程。

2. 研究内容和预期目标

研究内容:

本论文主要内容是克隆并表达联苯降解基因簇的调节蛋白bphd。包括：

1.设计引物，利用基因组dna进行pcr，同时提取质粒pet-28a( )。

3. 研究的方法与步骤

利用表达宿主e.colibl21(de3)，表达载体pet-28a( )和his₆-tag来表达蛋白bphd

步骤：

1.根据调节蛋白bphd的dna序列，检查可用的酶切位点，确定之后设计引物。

4. 参考文献

1 于萍萍, 张进忠, 林存刚. 多环芳烃在环境中污染的微生物降解的研究进展. 资源环境与发展, 2006, (3):35-39.

2 于秀艳, 丁永生. 多环芳烃的环境分布及其生物修复研究进展. 大连海事大学学报, 2004, 30(4):55-59.

3李霜, 李朝林, 吴维皑. 多氯联苯与人体健康[j]. 中华劳动卫生职业病杂志, 2005, 23(4):316-319.

5. 计划与进度安排

2. 3.13—4.9 设计实验方案，做好实验前准备，包括设计引物，购买相关的分子试剂盒，制备大肠杆菌感受态等。

3. 4.10—5.14 进行实验，包括pcr，酶切，连接，转化，挑阳性克隆，送测序，转化表达宿主，诱导，进行表达检测等。

4. 5.15—6.11 对实验数据进行整理分析，完成毕业论文，做好论文答辩