1. 研究目的与意义
ε-聚赖氨酸是由白色链霉菌发酵，经分离、提取和精制而成的一种具有抑菌活性的多肽，链长25-30个赖氨酸。ε-聚赖氨酸是具有优良性能和商业价值的生物防腐剂之一，除应用于食品防腐，还用作基因载体、药物包被物和环保材料，日本的ε-聚赖氨酸发酵技术处于世界领先水平。我国在ε-聚赖氨酸的发酵生产领域是远远落后于日本，我们要重视在这方面的研究，加快前进的步伐，希望能早日实现国内ε-聚赖氨酸的工业化大批量生产。
本实验研究目的是在确定本实验室前期筛选和紫外诱变得到的ε-聚赖氨酸生产菌具有合成ε-聚赖氨酸能力的基础上，通过对其进行摇瓶补料，从而使白色链霉菌能在发酵时最大限度地提高ε-聚赖氨酸的产量，同时探索ε-聚赖氨酸发酵的最优培养条件，为以后进一步提高菌株合成ε-聚赖氨酸的能力打下基础。
时代在进步，人民的生活水平也不断提高，对食品安全和“绿色食品”的关注度与日俱增，化学防腐剂在食品行业中的地位将逐渐被生物防腐剂取代，而要尽快取代化学防腐剂，加强生物防腐剂的开发无疑是最有效最便捷的途径。ε-聚赖氨酸是时下最热门的生物防腐剂，因为它有很广谱的抑菌性能，同时对人类无毒副作用。鉴于我国对ε-聚赖氨酸的研究还处于实验室研究开发的初步阶段，研究开发ε-聚赖氨酸具有重要的意义和广阔的前景。
2. 研究内容和预期目标
本研究立足于国内外研究现状，以白色链霉菌为生产菌，通过对其进行摇瓶补料，从而使白色链霉菌能在发酵时最大限度地提高ε-pl的产量，具体研究内容如下：
1）利用摇瓶发酵，每隔8h测其菌体浓度、葡萄糖含量、ε-pl的产量等指标，并绘制其生长曲线。
2）通过生长曲线找出最合适的时间点作为补料的时间，并把补料量统一设置为1ml，把各补料成分设置好合适的浓度。
3）通过摇瓶发酵，在相应的补料时间分别补1ml葡萄糖、1ml葡萄糖与1ml硫酸铵、1ml葡萄糖与1ml硫酸铵和酵母粉、1ml葡萄糖与1ml全料、不补料。
3. 研究的方法与步骤
甲基橙法测聚赖氨酸含量
取9ml发酵液加入离心管，4000rpm离心15min。取上清液吸0.5ml并加入磷酸缓冲液9.5ml(相当于稀释20倍)，取2ml稀释液与2ml甲基橙混合均匀，在30℃水浴锅中以4000rpm震荡30min,再4000rpm离心15min去沉淀。将上清液稀释10倍，测od465值。最后根据标准曲线算出ε-聚赖氨酸的含量。
4. 参考文献
[1]masanobunishikawa，kenichiogawa.distributionofmicrobesproducingantimicrobialε-poly-l-lysinepolymersinsoilmicrofloradeterminedbyanovelmethod.appliedandenvironmentalmicrobiology，2002，68（7）：3575-3581.
[2]朱宏阳，徐虹，吴群，等.ε-聚赖氨酸生产菌株的筛选和鉴定.微生物学通报，2005，32（5）：127-130.
[3]诸葛键，李华钟．微生物学[m]．北京：科学出版社，2004，333
5. 计划与进度安排
1）2016-03-04～2016-03-10：查阅资料撰写开题报告；
2）2016-03-11～2016-03-16：斜面培养基制备与菌种的活化；
3）2016-03-17～2016-04-01：通过前期预实验，绘制标准曲线；
