核糖体工程诱变选育多杀菌素高产菌研究开题报告

1. 研究目的与意义

1.1 研究背景

农业是人类赖以生存的基础，而农药的作用功不可没，它为农业的保产增收立下了汗马功劳。但是在过去，农药的使用是一把双刃剑，长期使用农药杀灭害虫的同时，也使得害虫的抗药性得到提高，化学农药在环境中稳定性好可以长期存在，造成严重的污染，并在动植物及人体中可以积累，因此被淘汰。近年来，一批批具有高效快速，专一性强，非靶标生物低毒或者无毒，在环境中无累积、降解快速等特性的生物农药出现了。生物农药就是直接利用生物活体（菌丝体、昆虫病毒等）或其产生的生物活性物质作为农药，包括微生物农药、生物化学农药、转基因生物农药和天敌生物农药。但是很多生物农药也有限制因素，比如大多数的生物农药通常不具有广效性，和化学农药相比杀虫效果较为缓慢，有效期限较短但是成本较高。所以兼具快速性安全性的生物农药是未来农药领域的重点发展对象。例如最近20年内一直经久不衰的生物农药多杀菌素就是一个典型代表，它不但具有生物农药的安全性，还具有化学合成农药的速效性，而且其作用模式独特对非靶标动物低毒，是保证食品安全性、环境安全、粮食生产安全于一体的一个具有长期发展的战略性物质。

1.2 研究意义

2. 研究内容和预期目标

2.1 主要研究内容

本研究立足于国内外研究现状，以白色放线菌刺糖多孢菌为生产菌，对刺糖多孢菌进行抗性筛选以及硫酸二乙酯诱变处理，使菌体在发酵时最大限度地提高多杀菌素的产量，具体研究内容如下：

1）研究不同浓度梯度的鼠李糖抗性平板，观察计数平板上的菌落数，确定合适的抗性浓度。

3. 研究的方法与步骤

3.1 主要研究方法：摇瓶发酵。

3.2实验步骤：

1）将自然筛选获得的菌株制成甘油管保存，甘油管接种到平板上进行活化处理，于28℃恒温培养7-10天。

4. 参考文献

[1]黄鑫.刺糖多孢菌发酵和制备条件的筛选和优化[d].湖南师范大学, 2012.

[2]胡旭晔.多杀菌素产生菌的诱变育种与发酵工艺研究[d].上海医药工业研究院, 2006.

[3]白云.多杀菌素发酵调控及过程工程研究[d].华中科技大学, 2015.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-25~2022-3-16）：查阅资料撰写开题报告，外文论文翻译；培养基制备与菌种的活化；

（2）第3周~第6周（2022-3-19~4-13）：设置不同硫酸二乙酯诱变处理时间，将孢子悬液分别稀释涂布于平板上。摇瓶发酵测定多杀菌素产量和菌体浓度。

（3）第7周~第11周（2022-4-16~5-18）：设置不同梯度发酵液的ph，摇瓶发酵7-10天后测定菌体浓度和多杀菌素产量；设置不同梯度发酵液的装液量，摇瓶发酵7-10天后测定菌体浓度和多杀菌素产量。