鲀属鱼类的线粒体16SrRNA基因序列保守性开题报告

1. 研究目的与意义

1.1背景

随着生物技术的发展和进步，人们对于生物种间关系和亲缘关系的探究不再停留于传统的表象特征，研究方向从器官、组织方面一直深入到细胞和分子水平。自19世纪细胞学说的建立，发现细胞是生命体的基本结构单位，以此将动植物联系在一起，生命之间存在的亲缘关系得以论证。在这期间电子显微镜的使用和同位素标记方法的应用大大推动细胞生物学发展到更深层次。20世纪中期，沃森和克里克两位科学家发现并提出dna的双螺旋结构，分子生物学由此诞生。从分子水平研究氨基酸或核苷酸序列的差异可以分析比较物种间亲缘关系，其相似率越高亲缘关系越近，反之越远。利用分子标记技术研究生物遗传信息的方法已经广泛覆盖基因文库构建、基因克隆等各方面。

线粒体基因组是一个能够从基因组水平上分析动物系统发生的分子标记。与核基因组相比，不仅可以独立进行dna的复制、rna的转录和蛋白质的翻译，而且编码率很高仅含少量不编码的序列，除此外，由于线粒体dna基本来源于卵细胞，所以还表现为严格的母系遗传，这对于研究物种起源进化及亲缘关系具有重要意义。现已较多的应用到鱼类亲缘关系及种间遗传信息的分析研究中。

2. 研究内容和预期目标

2.1研究内容

(1)苯酚-氯仿法提取暗纹东方鲀的基因组dna

(2)暗纹东方鲀线粒体基因组16srrna基因的克隆和鉴定

3. 研究的方法与步骤

1.试剂与材料

基础试剂：乙醇；灭菌水；1%凝胶；1×tae；lb培养基；marker；loading buffer

提取试剂：苯酚；氯仿；分离缓冲液；10%sds；3mol/l naac；10mg/ml蛋白酶k.

4. 参考文献

[1] 邵爱华, 朱江, 史全良, 等. 暗纹东方鲀线粒体12srrna基因的克隆及序列分析[j]. 苏州科技学院学院报, 2008, 12(25): 39-44.

[2] 马洪雨,郭金峰,岳永生.用改进的酚-仿法提取鱼类基因组dna效果的分析[j]..家畜生态学报,2006,27(2):85-87.

[3]张锐,孙美榕,等.鱼类基因组dna提取方法的优化及pcr扩增[j].水利渔业,2006,26(4):7-9.

5. 计划与进度安排

（1）2022.12.20-2022.03.11：与指导教师见面，确定所选题目，熟悉实验室药品所在位置和常用仪器使用方法，查阅相关文献资料并翻译外文文献，列出药品清单和实验步骤；

（2）2022.03.12-2022.03.18：根据列出的药品清单配制所需试剂并进行灭菌和相应温度保存。了解材料所放位置，确定最终实验步骤，撰写开题报告，制作ppt；

（3）2022.03.19-2022.03.25：学习提取鱼的基因组dna和扩增线粒体16srrna基因。学会使用pcr仪，对pcr反应体系，循环参数进行摸索和调整等措施，学会制胶和割胶回收；