人类SVBP蛋白的体外定点突变的构建研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究的背景：

血管新生(angiogenesis)，即从原有的血管中长出新的血管的过程，这一概念由folkman于1971年首次提出，并很快成为专家研究领域的热点，同时抗血管生成治疗肿瘤的策略也倍受关注。血管新生参与了机体一系列重要的病理生理事件，如发育、生殖、创伤愈合、肿瘤的生长及缺血性视网膜病变等，多种血管调节因子参与了这一动态过程，近年来发现一种血管新生抑制蛋白( vasohibin，vash)也参与了这一过程的调节。vash有两个同系物，即vash1及vash2，两者具有52.5%同源氨基酸序列。vash1是在vegf诱导人脐静脉血管内皮细胞（huvecs）基因表达谱的dna微阵列实验中所发现，受外源性vegf浓度依赖性调节且具有抗血管生成的活性，它普遍表达于人体的各个组织器官，vash1是目前已知发现的唯一以负反馈为作用机制调节血管生成因子，可抑制血管生成；而vash2与其恰恰相反，它高表达于骨髓起源的单核细胞中且不依赖于vegf的浓度调节，具有促进血管生成的作用。

vash1主要由内皮细胞分泌后发挥血管新生调节作用，我们知道传统的分泌蛋白通常都具有一个由连续的疏水性氨基酸组成的经典分泌信号序列，它一般位于氨基酸的n末端域，当靶蛋白通过er膜的时候可被信号蛋白水解酶移除，于是蛋白得以分泌出来。但vash1是一个非传统的分泌蛋白。yasuhiro suzuki等应用酵母双杂交技术研究vash的结合部分时，结果发现了1个候选基因，即分析分离出一种只有66个氨基酸的vash1结合配体—小血管新生抑制结合蛋白( small vasohibin binding protein，svbp),该蛋白通过发挥分子伴侣作用促进vash1分泌且在物种间高度保守。在细胞实验中，vegf可以刺激血管内皮细胞表达vash1，同时也表达svbp。其定位于血管内皮细胞，在血管内皮细胞内与vash1结合，形成一个异质二聚体，促进vash1溶解和分泌，维持vash1在血管内皮细胞的含量，阻止其泛素化作用，增强抗血管生成活性。但是对于vash2是否也有此作用尚未有相关研究证实。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：

蛋白质酪氨酸化是蛋白质重要的功能调节之一，在细胞周期调控过程中起着重要的作用。本实验主要研究一种小分子血管抑制结合蛋白（svbp），该蛋白能与血管抑制蛋白（vash）相结合，这两个蛋白相互作用后具有微管去酪氨酸活性。进而调节微管的组装与去组装。我们主要通过体外构建该蛋白的重组蛋白，让该蛋白在大肠杆菌中进行表达，进而研究其与其他蛋白的相互作用以及蛋白结构的具体信息，为后续功能性研究或蛋白相互作用研究提供物质基础。

3. 研究的方法与步骤

(一)人类svbp蛋白的突变设计

1.确定目的基因序列

在ncbi数据库中查找svbp蛋白的基因序列

4. 参考文献

[1]suzuki y，kobayashi m，miyashita h，et al． isolation of a small vash binding protein ( svbp) and its role in vash secretion.［j］． journal of cell science，2010，123: 3094 － 3101．

[2]zhang t，yu t t，zhang d m，et al． vasohibin － 1 expression detected by immunohistochemistry correlates with prognosis in non －small cell lung cancer[j]．medical oncology，2014，31( 5) : 1 － 6．

[3]iqbal zafar,tawamie hasan,ba wei et.al.loss of function of svbp leads to autosomal recessive intellectual disability, microcephaly, ataxia, and hypotonia.［j］.genetics in medicine : official journal of the american college of medical genetics,2019

5. 计划与进度安排

本论文的各阶段安排为：

1、2019-2020-1学期17-20周～2019-2020-2学期第1～2周(2019-12-18～2020-3-6)确定选题，按照指导教师要求查阅资料

2、第3周～第4周（2022-03-9～2022-03-20）准备和撰写开题报告