人类SVBP蛋白的结构域体外构建研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：血管新生(angiogenesis)，即新生血管形成的过程，这一概念由folkman于1971年首次提出，并很快成为肿瘤研究领域的热点，同时抗血管生成治疗肿瘤的策略也倍受关注。血管新生存在于包括肿瘤在内的多种生理和病理过程中，且受到局部环境中血管生成促进因子和抑制因子的共同调节，这一过程对肿瘤增殖、侵袭、转移能力尤为重要。vasohibin蛋白家族是最新发现的一类血管生成调节因子，目前发现的该家族成员有vasohibin-1(vash1)和vasohibin-2(vash2)。vasohibin大部分分布在肿瘤诱生血管内皮细胞内，vash1主要在血管内皮细胞中表达，可终止血管新生过程。而vash2在渗出的单核细胞或癌细胞中表达，促进血管生成。目前发现小分子vasohibin结合蛋白(smallvasohibin-bindingprotein,svbp)可在细胞内与vasohibin结合并形成异源二聚体，促进vasohibin的分泌，敲除svbp则可抑制vasohibin分泌，导致细胞内的vasohibin经泛素蛋白酶体系统降解。svbp蛋白是一个66残基的蛋白质，充当分子伴侣样肽。针对vash2通过外分泌途径作用于毗邻的血管内皮细胞促进血管新生和肿瘤生长转移这一特性，设计靶向其外分泌分子伴侣svbp的药物抑制vash2与svbp的结合和外分泌，可能也是抑制肿瘤血管生成的有效途径之一。vasohibin是主要的微管蛋白脱酪氨酸酶可确定启动脱酪氨酸-酪氨酸循环的分子的性质，α-微管蛋白的c端经历一个脱酪氨酸/酪氨酸循环，这个循环的失调与癌症和其他疾病有很大关系。在微管蛋白的脱酪氨酸/酪氨酸循环中，α-微管蛋白的c端酪氨酸被酪氨酸羧肽酶（tcp）去除，tcp即被vasohibin与svbp控制执行的酶，并被微管蛋白酪氨酸连接酶（ttl）重新添加。尽管对vash-svbp的微管蛋白羧肽酶活性进行了遗传和生化研究，但由于缺乏vash/ svbp的具体结构信息，α-微管蛋白脱酪氨酸作用的详细分子机制仍不清楚。

研究目的：研究svbp蛋白与其他蛋白的相互作用，该蛋白结构的具体信息，为后续功能

2. 研究内容和预期目标

研究内容：蛋白质酪氨酸化是蛋白质重要的功能调节之一，在细胞周期调控过程中起着重要的作用。本实验主要研究一种小分子血管抑制结合蛋白（SVBP），该蛋白能与血管抑制蛋白（VASH）相结合，这两个蛋白相互作用后具有微管去酪氨酸活性。进而调节微管的组装与去组装。我们主要通过体外构建该蛋白的重组蛋白，让该蛋白在大肠杆菌中进行表达，进而研究其与其他蛋白的相互作用以及蛋白结构的具体信息，为后续功能性研究或蛋白相互作用研究提供物质基础。

预期目标:svbp蛋白体外结构域构建成功

3. 研究的方法与步骤

研究方法:本课题拟采用文献研究法，实验法，理论分析与实证解剖相结合的研究方法，着重研究分析svbp蛋白结构域体外构建方面的未知，并通过实验与理论相结合得到有意义的结果。

研究步骤：

1.通过ncbi数据库确定目的基因序列

4. 参考文献

1.程诚，郑瑞锋和王彦威；vash vash1 1和 和vash vash2 2表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响 表达对食管鳞状细胞癌患者预后的影响，2019，《癌症进展》，23期

2.葛倩倩，涂敏，高文涛等；核型vash2促进人胚胎组织细胞的增殖研究，《南京医科大学学报》，2015年5月

3史建红,王冰,周金飒,陈保平. vasohibin蛋白质家族与肿瘤血管新生[j]. 生命的化学,2014,34(04):512-516.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周，查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；（2）第3周~第6周（2022-3-9~4-3），查阅资料，设计引物，选择突变位点，合成基因序列初步设计,优化实验步骤（3）第7周~第11周（2022-4-6~5-8），PCR扩增、细胞转化、感受态细胞制备，细胞培养、转化子的检测以及重组子等（4）第12周~第14周（2022-5-11~5-29），整理、撰写论文，完成；

（5）第15周~第16周（2022-6-1~6-10），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。