新方法合成用于分离提取组氨酸标签蛋白的两种磁珠的研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

一．金属螯合层析的研究进展

蛋白质是生物体中含量最多、拥有多种重要功能的大分子。在生命系统中是绝大多数功能的执行者。因此分离纯化蛋白显得尤为重要。目前分离纯化蛋白质多根据不同蛋白质的分子量、荷电状态、溶解度的不同以及官能团的差异而产生。代表方法有超滤、密度梯度离心、等电点沉淀法、离子交换层析以及亲和层析^[1][8]。

其中金属螯合层析具有很强的选择性和负载能力^[2]。金属螯合层析是最早由porach等人^[3]在1975年发现的一种利用在载体上螯合过渡金属离子如zn² 、cu² 、ni² 等分离纯化蛋白质的方法。金属离子存在空轨道可与目标蛋白质上的多种氨基酸如组氨酸、赖氨酸、色氨酸上的活性基团^[4]之间配位结合，从而使目标蛋白被吸附到带有金属离子的载体上，再用洗脱液将蛋白洗脱可得到纯化后的目标蛋白。其应用非常广泛，朱迎春^[23]等人利用金属铜螯合层析纯化了人铜锌超氧化物歧化酶；王晓军^[24]等人则利用金属螯合层析对类人胶原蛋白进行了分离纯化；杨燃^[25]等人利用此方法从蛋清中富集出磷酸肽并对其成分进行了分析；纳米尔^[26]等人纯化了紫草籽中的铜锌超氧化物歧化酶；yoh-ichi y^[27]等人用金属螯合层析提取出了7种氟喹诺酮类药物的提取物并对其进行分析。水凝胶、硅胶、羟基磷灰石以及多孔玻璃是目前最常见的金属螯合层析载体，但其有分离速度较慢、选择性不够高、不能大规模生产等缺点。为了解决这一系列问题，近年金属鳌合磁性微粒备受关注。

2. 研究的基本内容与方案

一．主要内容

1.合成带天冬氨酸配基的磁珠并进行表征。

2.合成带羧甲基天冬氨酸配基的磁珠并进行表征。

3. 研究计划与安排

9.15-10.31用新型方法制备两种磁珠。

11.1-11.15 细菌培养、细胞破碎获得分别含有dspb和gfp的蛋白质悬液。绘制生长曲线、进行诱导对比。验证磁珠对两种蛋白的选择性。

11.16-11.30 ph值对磁珠纯化dspb影响的研究。

4. 参考文献（12篇以上）

1. 王子佳, 李红梅, 弓爱君, et al. 蛋白质分离纯化方法研究进展[j]. 化学与生物工程, 2009(08):13-16.

2. li r , chen p , zhang n , et al. study on the affinity characteristics of proteins on the immobilized metal affinity chromatography column[j]. analytical methods,2019,11:4341-4347.

3. jerker porath, jan carlsson, ingmar olsson,等. metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation[j]. nature, 1976, 258(5536):598-599.

   剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付