用酵母双杂交筛选COPI囊泡相关v-SNARE蛋白Use1和Sec20与细胞自噬蛋白间的互作开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义

真核生物体的细胞内，细胞器、蛋白质及核酸等物质的合成与降解存在着一个动态的平衡(suzuki and ohsumi 2007)，这些大分子物质的降解通过一种叫细胞自噬（autophagy）的途径来完成。细胞自噬在真核生物体中普遍存在且具有高度的保守性，它是依赖于细胞内溶酶体（酵母中为液泡）介导的一种细胞质物质的降解途径(xie and klionsky 2007; nakatogawa et al. 2009) 。同时，细胞自噬在生物体的生长发育、免疫防御、预防神经退行性病变等多个方面有着至关重要的作用(cecconi and levine 2008; mizushima et al. 2008; munz 2010)。

2．国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

1. 研究目标

利用酵母双杂交技术筛选可能与snare蛋白use1和sec20互作的细胞自噬相关蛋白，为阐明use1和sec20调控细胞自噬的分子机制提供实验的基础。

2. 研究内容

3. 研究的方法与方案

1.研究方法与实验方案

1.1扩增目的基因全长序列

利用pcr扩增技术扩增目的基因sec20和use1的全长序列。

4. 研究创新点

snare蛋白use1和sec20参与copi囊泡与内质网的融合，而本实验室前期工作发现use1和sec20也参与细胞自噬运输，但它们参与细胞自噬的分子机制并不清楚，本课题通过酵母双杂交技术检测use1和sec20与细胞自噬相关蛋白之间可能存在的物理互作关系，这对阐明use1和sec20调控细胞自噬的分子机制提供坚实的基础。

3. 技术路线

pcr扩增获得相应目的基因全长序列

5. 研究计划与进展

本课题计划于3月中旬开始

第一阶段：预计2周

内容：完成目标蛋白质基因片段的扩增以及质粒的构建