1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
课题意义犬瘟热病毒为单股不分节段、负链rna病毒，是副黏病毒科麻疹病毒属的成员之一，其基因组全长15690nt，分别编码核衣壳蛋白（n）、磷蛋白（p）、基质膜蛋白（m）、大蛋白（l）、融合蛋白（f）和吸附蛋白（h）六个主要结构蛋白，，其中的f与h蛋白都是犬瘟热病毒的膜表面糖蛋白，h蛋白是病毒与细胞受体结合的蛋白质，可以协助f蛋白使cdv囊膜与细胞膜发生融合而侵入宿主细胞[1]，h蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要抗原，在抗cdv免疫中起着重要的作用，犬瘟热的预防主要依靠接种疫苗，应用最为广泛的是弱毒活疫苗，但也存在一些问题。
随着分子生物学技术的深入发展，国内外学者应用基因工程技术研究新型疫苗，以重组活载体疫苗的研究最为热门，并且在以痘病毒、腺病毒和疱疹病毒为重组疫苗载体的研究上取得较大的进展。
从而我们可以通过获得大量纯化的h、n蛋白来研究其结构与功能的多样性从而研制基因工程疫苗或制备更加灵敏特异的诊断试剂。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标： 在已构建的表达犬瘟热病毒囊膜蛋白活病毒载体基础上进一步开展动物实验，评价该亚单位疫苗的免疫保护力。
研究内容：1、学习和掌握培养细胞的方法2、大量富集可表达H 与N蛋白的病毒液3、使用western blot方法检测病毒液是否表达H与N 蛋白4、掌握测定病毒液滴度的方法5、制备免疫家兔、实验比格犬的抗血清6、通过病毒中和实验的方法测定抗体的中和效价关键问题：1、富集大量正确表达H 与N蛋白的病毒液2、制备采取具有一定效价的家兔、比格犬抗血清3、病毒中和实验技术的掌握
3. 研究的方法与方案
研究方法1、复苏pk15猪肾细胞 细胞传代 病毒液的富集2、 检测病毒蛋白是否表达（western blot方法）3、病毒液滴度的测定（测定病毒液pfu）4、免疫家兔方法（皮下多点注射）5、制备兔抗血清（耳缘静脉采血）6、测定抗体中和效价（ 病毒中和实验方法）7、免疫实验比格犬测定中和效价实验方案1、富集病毒液2、观察实验动物一周3、测定病毒液滴度4、注射疫苗株并观察动物的健康状况5、制备兔抗血清6、病毒中和实验测定抗体中和效价7、制备犬抗血清8、病毒中和实验测定该疫苗株的免疫保护力可行性分析1、在已构建的表达犬瘟热病毒囊膜蛋白活病毒载体基础上进一步开展动物实验，评价该亚单位疫苗的免疫保护力的实验已有相关报道，譬如制备貂抗血清，该实验技术已成熟。
2、实验室中的研究生和博士生已经积累了丰富的经验，这对项目的顺利实施非常有帮助。
3、本科期间做过大学生创新实验项目训练，具有一定的实验技能与努力刻苦创新的精神。
4. 研究创新点
特色或创新之处 构建的表达犬瘟热病毒囊膜蛋白活病毒载体基础上进一步开展动物实验，通过接种新西兰白兔、实验比格犬等实验动物观察该疫苗株免疫保护率。
建立病毒中和实验、免疫荧光实验以及免疫蛋白印迹等实验方法来完成该疫苗株的免疫保护 力评价.
5. 研究计划与进展
研究计划1、 2016.2~2016.3复苏pk15猪肾细胞并传代，富集病毒液并检测是否正确表达h与n蛋白，熟悉实验室，准备试验所需仪器和材料2、 2016.3~2016.4测定病毒液滴度，免疫家兔后制备兔抗血清，病毒中和实验测定抗体效价3、 2016.4~2016.5免疫实验比格犬，制备犬抗血清，测定该疫苗株的免疫保护力4、 2016.5整理相关实验数据，得出实验结论，正式撰写论文并办理结题有关手续预期进展1、成功测定该亚单位疫苗株的免疫保护力。
2、完全掌握培养细胞、病毒中和实验等相关实验的原理和方法。
3、能熟练使用各种实验仪器设备、掌握基本科研技能、了解科研论文写作方法、实践创新能力进一步提高。
