1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
近些年,禽流感这一词语屡屡出现我们视线中,为大众所熟知,这几年频频爆发的禽流感疫情也给我们带来了诸多困难,而在禽流感方面的研究也越来越受到社会各界的重视。
禽流感(avianhifluenza,al)是由禽流感病毒(avianhifluenzavirus,aiv)引起的多种动物易感传染病,不仅在禽类、猪等动物间发生传染,其中h5n1、h7n7、h9n2等亚型禽流感病毒会发生感染人的现象。是危害世界养禽业的重要传染病之一,社会上爆发流感传染病的历史中也有很多是由于禽流感病毒感染的[1]。而且禽流感病毒突变几率高,对疫苗研发是一种阻碍,因此更深入的了解流感病毒宿主限制的生物学和遗传学基础,是确定一种新的流感病毒能否在人类之间暴发流行的关键。
禽流感病毒往往具有较高的突变率,而在其编码的蛋白中,又以血凝素(ha)的突变频率最高,是其变异、毒力和宿主特异性的主要决定因素。ha是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分,也是流感病毒主要表面抗原和保护性抗原,能刺激机体产生中和抗体。ha裂解位点氨基酸序列是决定禽流感病毒致病性和毒力强弱的关键性因素之一。[2]因此本次研究是对h9n2禽流感病毒分离株第2号片段ha进行了分子遗传变异研究,为我国h9n2禽流感的防治提供理论依据。
树突状细胞[3](dendriticcell,dc)是目前所知的功能最强的抗原递呈细胞细胞,是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(antigenpresentingcells,apc),它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,未成熟dc具有较强的迁移能力,成熟dc能有效激活初始型t细胞,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。它们通常少量分布于与外界接触的皮肤(黏膜)部位。血液中也可发现他们的未成熟型式。他们被活化时,会移至淋巴组织中与t细胞与b细胞互相作用,以刺激与控制适当的免疫反应。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标
本次试验通过研究h9n2亚型禽流感病毒片段血凝素(ha)的提取,作用在小鼠树突状细胞,观察其对小鼠树突状细胞mirna的影响。若该片段对树突状细胞的影响大,证明ha是对免疫系统有着重要作用的一个禽流感病毒片段。对今后流感病毒疫苗的研制和的人体免疫系统的提升有着重要影响。
研究内容
3. 研究的方法与方案
研究方法及技术路线
小鼠骨髓树突状细胞体外诱导培养
目的基因载体的构建
4. 研究创新点
在之前的实验中已经有人研究过H7N9亚型禽流感病毒对小鼠树突状细胞miRNA的影响,本实验是进一步深入探究,是流感病毒RNA中哪一个片段对树突状细胞miRNA有影响,以及是怎样的影响。
5. 研究计划与进展
3月到4月构建表达载体,并且在4月进行细胞培养。
5月中上旬病毒和质粒导入受体细胞,测定其具体形态学变化定性定量进行分析其化学性质的变化
5月中下旬:实验收尾总觉并进行论文的撰写
