1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1 研究意义
绿色农业是目前的农业发展趋势和整个社会对农产品的要求。实现绿色农业的一大难点在于用无公害方法实现对于害虫的有效控制。低毒、低残留、易降解、对环境无不良影响的生物农药的研究受到关注,新型生物杀虫剂有望成为控制作物虫害、保障食品安全的根本途径之一[1]。其中昆虫病原线虫-共生菌共生体可以用于防治农林牧草害虫,且对人畜、植物及有益生物安全成为当前国际生防领域研究的热点,并在欧美一些国家可以豁免注册生产和释放[2, 3]。本研究通过肠道侵染分析serratia nematodiphila与imd途径的互作机制。为深入研究heterorhabditidoides-serratia 类昆虫病原线虫共生体的杀虫机理提供参考,为这一共生体在生物防治中的实际应用提供理论依据。
2.国内外研究现状
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标
本研究使用serratia nematodiphila 单菌液分别以喂养的方式侵染drosophila野生型、和imd免疫途径中pgrp-lc、predd,relish突变体,通过对共生菌侵染后野生型和突变体果蝇的存活率分析,血淋巴cfu计数,相关抗菌肽drosomycin、diptericin 的mrna表达荧光定量pcr分析,研究serratia nematodiphila侵染过程中drosophila 体液免疫imd途径的模式识别,信号联级放大和抗菌肽基因启动这几个重要环节的作用大小与响应模式。从而进一步分析serratia nematodiphila与imd途径的互作机制。为深入研究heterorhabditidoides-serratia 类昆虫病原线虫共生体的杀虫机理提供理论依据。
2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法,技术路线与实验方案。
(1)培养果蝇 以实验室保存的野生型和pgrp-lc、predd,relish突变体drosophila为种蝇,采用无菌标准培养基置于恒温培养箱培养。
(2)果蝇共生菌侵染以果蝇的pgrp-lc、predd,relish免疫突变体为实验组,野生型为对照组,采用含菌蔗糖水喂食的方式造成肠道侵染 。肠道侵染试验方法:每个突变体麻醉后取出大小一致的15只果蝇,调节细菌浓度为od600为0.1左右,用50mm蔗糖水悬浮菌体,并在底部放有无菌吸水纸的培养管中每管中加入2ml悬浮液,对照组按上述步骤放入无菌蔗糖水,放入果蝇后至于培养箱培养。
4. 研究创新点
目前,国内外研究多以注射造成血腔侵染来研究昆虫病原菌与果蝇的互作情况。
肠道侵染的报道较少。
本研究采用肠道侵染模式。
5. 研究计划与进展
2014.2 ~ 2013.3 细菌及果蝇的培养,及前期的预实验
2013.4 ~ 2014.5 果蝇的感染及感染后的结果分析。
