1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
意义: 目前,国际上对苯胺类除草剂微生物降解虽也有不少研究报道,但主要集中在降解菌株的分离筛选及代谢途径的研究上,且许多分离的降解菌株都具有一定的局限性,代谢途径的研究也不够全面和彻底。
在降解基因及酶的水平上研究苯胺类除草剂的降解机理则很少报道。
通过对苯胺降解基因簇降解机理的研究,能更好的利用这些来降解环境中苯胺类污染物。
2. 研究的基本内容和问题
1.分离筛选更优良的苯胺类除草剂降解微生物的种质资源;2.在降解基因及酶的水平上研究苯胺类除草剂的降解机理;3.确定YBL2苯胺降解基因簇转录调控机制。
3. 研究的方法与方案
方法技术:菌株基因组dna提取分离;菌株质粒基因组dna提取分离;rna提取、分离;rt-pcr;苯胺降解基因簇的pcr扩增;苯胺降解基因簇表达载体构建等。
实验方案:①rt-pcr:在ybl2生长过程中,用苯胺诱导后提取rna。
通过rt-pcr 验证苯胺的诱导是否影响苯胺降解基因簇的表达。
4. 研究创新点
国际上对苯胺类除草剂微生物降解虽也有不少研究报道,但主要集中在降解菌株的分离筛选及代谢途径的研究上,且许多分离的降解菌株都具有一定的局限性,代谢途径的研究也不够全面和彻底。
ybl2苯胺降解基因簇与已报道的基因簇相比,在基因组成、排布及同源性方面有较大差异。
因此,其转录调控机制未知,通过对其研究并与其他已报道的基因簇进行比较,有助于苯胺降解分子机理的进一步研究。
5. 研究计划与进展
研究计划:2013.12-2013.02 资料查阅、实验方案确定和可行性分析;2014.02-2014.03 苯胺诱导YBL2生长,提取RNA 进行RT-PCR,验证苯胺降解基因簇的表达;2014.03-2014.04 将YBL2 苯胺降解基因簇的启动子替换菌株PKP302 的启动子,验证启动子表达情况;2014.04-2014.05论文撰写与修改。
预期进展:确定YBL2苯胺降解基因簇转录调控机制。
