1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
意义:(1)多抗霉素是一种安全农药,高效、低毒、无环境污染。对我国的食品安全有重大意义。
(2)实际生产中多抗霉素工业菌株容易衰退并且效价不高。
(3)本项目以多抗霉素工业菌株为研究材料。在复壮的过程中使用不同培养基、培养条件,从而获得菌种稳定传代的方法。通过不同诱变条件来获得高产菌株。
2. 研究的基本内容和问题
目标:(1)为了解决传代中的衰退问题,在复壮的过程中改变培养条件,通过形态分析和菌落计数来分析其对菌株复壮的影响,从而获得菌种稳定传代的方法。
(2)经过不同的诱变方式,对菌株进行液相分析,通过多抗霉素浓度来分析菌株诱变的影响,通过实验来获得高产的稳定传代的菌株。为工业生产打好理论基础。
内容:(1)复壮:控制培养基中营养元素的配比(n素,c素),改变培养的条件(温度,光照,ph等),添加其他的物质(土壤滤液等),通过菌落计数和形态比较,来观察和分析其对复壮的影响。获得稳定传代的方法。
3. 研究的方法与方案
研究方法:(1)复壮:改变平板培养基营养元素,改变培养条件,平板稀释涂布,通过菌落计数和形态分析来比较各条件影响。
(2)诱变:对紫外诱变时长、光强、波长调整,使用不同诱变剂,平板稀释涂布,对多抗霉素浓度液相分析,同一浓度横向对比各条件对诱变的影响。
技术路线:
4. 研究创新点
1.目前,对多抗霉素*的分析方法主要是生物效价测定法,但该法操作繁杂,耗时长,准确度低,精密度差,不适合用于工厂质量控制和市场监督检测。在液相色谱条件下,多抗霉素*与杂质分离效果好,获得稳定的数据,有较高的精密度和准确度,简化了操作过程,特别适合实验室和工业化生产中的质量控制。
2.通过稀释涂布横向对比,减少血球计数板计数的过程,操作更加简便。
5. 研究计划与进展
计划:初始菌种》种子培养基恒温摇床(28℃,180r/min,4d)》发酵培养基(小摇瓶)恒温摇床(28℃,180r/min,2d)》液相检测结果,菌种有活性,可以用于复壮诱变》使用不同配比培养基同步培养,配斜面培养基涂布平板完成后封口便可放入恒温培养箱培养(28℃,10d)》离心洗涤,玻璃珠振荡分散20min》单细胞或孢子悬浮液,自然分离(对照液)活菌计数》诱变处理》斜面培养初筛,恒温培养箱培养(28℃,10d左右)》斜面培养复筛,恒温培养箱培养(28℃,10d左右)》斜面培养自然分离和再复筛,恒温培养箱培养(28℃,10d左右)》保藏及扩大实验
预期进展:2014.1.42014.1.19 第一次进行实验,主要是熟悉过程。挑选菌种进行斜面培养,在进行种子培养基,发酵瓶培养。对发酵液离心、萃取、稀释,液相分析多抗霉素含量。
2014.3.12014.4月初 查找文献,对目标菌种进行复壮,扩大培养。进行液相分析。
