1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1 本课题研究意义
1.1 植物dna甲基化与去甲基化
dna甲基化是真核生物中分布最广也是最重要的表观遗传修饰类型。植物dna甲基化是指在甲基转移酶的作用下,s-腺苷甲硫氨酸上的甲基基团被转移到胞嘧啶五号碳原子上面的过程[1]。dna甲基化主要存在于基因、基因间、转座因子和重复序列。目前发现的植物甲基化主要有从头甲基化(de novo dna methylation)和维持甲基化(maintenance dna of methylation)两种模式[2]。维持性的甲基化指dna双链中的一条链已经存在甲基化,dna半保留复制过程中另一条链通过甲基转移酶来维持甲基化状态。从头开始的dna甲基化即dna两条链均没有甲基化,通过不同的甲基转移酶(dnmts)催化先使其中一条链甲基化,然后再使另一条链甲基化,这种方式不依赖于dna复制。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标
甲基化对植物体生长发育具有重要意义,ros1作为一种拟南芥dna去甲基化酶能够影响拟南芥dna的甲基化。通过研究,筛选出ros1的互作蛋白,研究ros1的工作原理。
研究内容
3. 研究的方法与方案
研究方法
本研究运用酵母双杂交方法,以ros1为诱饵蛋白,构建cdna文库,筛选ros1的互作蛋白。
技术路线4. 研究创新点
特色或创新之处
酵母双杂交系统为研究蛋白质问的相互作用提供了一套崭新的方法。理论上,任何一个AD(转录激活域)都可以与任何一个BD(DNA结合域)结合并激活基因转录,即杂合的BD和AD可以形成具有功能的转录激活蛋白。不仅如此,只要BD和AD能够通过一定的方式在空向上足够地靠近,即使它们之间没有共价结合也可以激活基因转录。本实验通过酵母双杂交的方法来筛选拟南芥cDNA文库获得ROS1的互作蛋白,为实验提供了有利条件。
5. 研究计划与进展
1 研究计划
1.1 前期准备
在2019年下半年准备好拟南芥突变体幼苗并培养,准备好实验所需菌株。
