犬吉氏巴贝斯虫实时荧光PCR检测方法的建立开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

犬巴贝斯虫病是一种寄生于宿主红细胞的顶复门虫属且引起的威胁宿主生命的寄生虫病。

它是通过媒介蜱虫传播的由犬巴贝斯虫（b.canis）和吉氏巴贝斯虫（b.gibsoni）感染产生，这种疾病在全世界广泛分布[1，2]。

犬吉氏巴贝斯虫病因虫种的不同而产生的临床反应不同。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标：1.建立犬吉氏巴贝斯虫实时荧光定量 pcr 方法；2.绝对荧光定量pcr 条件优化。

研究的内容：1.实验犬的血液提取犬吉氏巴贝斯虫；2.根据 genbank中犬吉氏巴贝斯虫 18s rrna基因保守序列设计引物，构建标准阳性质粒，建立犬吉氏巴贝斯虫实时荧光定量 pcr 方法。

；3.绝对荧光定量pcr 条件优化。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1.病料的采集与收集法：实验犬的血液提取犬吉氏巴贝斯虫。

2.实验法：根据 genbank中犬吉氏巴贝斯虫 18s rrna基因保守序列设计引物，构建标准阳性质粒，建立犬吉氏巴贝斯虫实时荧光定量 pcr 方法。

技术路线：1. 吉氏巴贝斯虫dna 提取。

4. 研究创新点

近几年来，随着人们生活水平的提高，养狗的数量也急剧增多。

吉氏巴贝斯虫是寄生在犬红细胞中的一种蜱传原虫，可引起犬发热、贫血、血红蛋白尿和消瘦，甚至死亡。

目前,该病在国内广泛分布,有蜱滋生的地方,春、夏、秋季均可发病。

5. 研究计划与进展

第一阶段：病料的采集与收集通过在兽医院门诊的实习，收集可疑病例的相关资料，于此同时通过实验对实验犬进行犬吉氏巴贝斯虫的人工感染。

第二阶段：实验室操作建立犬吉氏巴贝斯虫的实荧光 PCR 检测方法，根据 GenBank中犬吉氏巴贝斯虫 18S rRNA基因保守序列设计引物，构建标准阳性质粒，建立犬吉氏巴贝斯虫实时荧光定量 PCR 方法。