分子伴侣DsbB、DsbC和Skp的克隆及表达开题报告

 2022-02-07 17:21:47

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

国内外研究现状及应用前景:

分子伴侣是一类结合并稳定其它蛋白质的不稳定构象,通过可调控的结合和释放,促进细胞内蛋白质的正确折叠、跨膜转运、寡聚体组装;蛋白与细胞内其它组分的相互作用、有活性和无活性蛋白构象的转换、胞内转运以及蛋白质降解;但自身并不发生任何变化的一大类广泛存在于生物体内的蛋白质分子。根据参考文献,分子伴侣分为hsp70、hsp40、hsp90、ribosome-associatedchaperone、chaperonin、hsp100、smallheatshockprotein(shsp)等7个主要家族,在大肠杆菌中,分子伴侣又主要有triggerfactor(tf因子)、hsp70家族、伴侣蛋白、折叠酶等。研究表明,分子伴侣有如下功能:1、在蛋白质折叠过程中起辅助作用,提高蛋白质折叠和组装速度并防止形成包涵体;2、参与遗传物质的复制转录及生物信号转导;3、参与细胞周期与凋亡的调控;4、可以成为感染性疾病中的免疫优势抗原,激发宿主体内的体液免疫反应和t细胞介导的细胞免疫反应;5、帮助细胞修复损伤,清除机体内损伤的蛋白,与人类寿命相关。根据相关研究,分子伴侣可以帮助我们更深入理解蛋白质折叠过程,为研究某些疫苗提供指导等。

本课题的研究意义:

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:克隆目的基因,构建表达载体,使分子伴侣dsbb、dsbc和skp得到表达。

研究内容:

1、提取大肠杆菌基因组、设计引物克隆出目的基因;

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3. 研究的方法与方案

研究方法及实验方案:

1、大肠杆菌基因组的提取采用酚-氯仿法,从菌液中得到基因组dna,再进行琼脂糖凝胶电泳验证。

2、引物设计使用primerpremier5.0软件辅助设计

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4. 研究创新点

本课题具有较大的研究意义,分子伴侣在蛋白质折叠过程中起到重要的辅助作用,而研究蛋白质折叠又对提高生物工程产品的产率、设计和改造蛋白质分子、研究开发用于治疗由蛋白质错误折叠而导致的疾病的药物等诸多领域具有重大意义。本课题的研究成果可为上述研究提供指导价值。

5. 研究计划与进展

第一阶段(2015.9-2015.10)完成基因组的提取及目的基因引物的设计

第二阶段(2015.11-2014.12)完成对目的基因进行扩增,t载体连接测序

第三阶段(2015.12-2016.3)完成表达载体的构建,目的基因的诱导表达及鉴定

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