利用VIGS体系快速鉴定小麦TaRLK基因在抗赤霉病中的功能开题报告

 2022-02-07 17:25:19

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

病毒诱导的基因沉默技术(vigs)是近年发展起来的一种通过抑制基因转录研究植物基因功能的快速方法,以大麦条纹花叶病毒(barleystripemosaicvirus,bsmv)改造的vigs(virusinducedgenesilencing)载体在小麦中能够介导基因沉默,因此bsmv在小麦基因功能鉴定中具有广泛的应用。与其他鉴定小麦基因功能的研究方法(如基因突变,转基因等)相比,病毒诱导的基因沉默具有研究周期短,不需要遗传转化,可在不同的遗传背景下生效等优点,正逐渐发展成为高通量的分析小麦基因功能的方法。本课题利用vigs技术来快速鉴定小麦tarlk基因的抗赤霉病功能,尝试建立起一种新的候选基因的功能分析方法,这对今后的各类基因功能研究都能带去不少便利。

vigs技术应用的领域越来越广泛,应用最多的是鉴定植物功能基因。如用于本氏烟、番茄、拟南芥、烟草、红辣椒、罂粟等作物的植物基因功能研究。研究揭示vigs在植物体的组织和器官中可诱导目标基因沉默,如trv载体能够在番茄植株的多个部位产生沉默效果,如叶片、花、果实等。

如宋伟杰[1]等利用一种基于pebv(peaewrlybrowningvirus)的vigs载体诱导研究一个豌豆pi同源基因的功能。豌豆在其pspi基因沉默后出现了类似拟南芥pi突变体、金鱼草glo突变体的表型,导致其花瓣向萼片以及雄蕊向心皮转变。众多的研究表明vigs技术是研究植物基因功能快速有效的方法,尤其是对于一些转化困难的非模式植物基因功能的研究更为重要。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:鉴定tarlk的抗赤霉病功能

研究内容:利用vigs技术确定小麦抗赤霉病关键基因的候选基因tarlk是否有抗赤霉病功能。

关键问题:如何在小麦穗部成功利用vigs技术定向沉默所研究基因。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:vigs基因沉默技术

技术路线:

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4. 研究创新点

本实验室之前鉴定抗赤霉病候选基因的功能多使用的是过表达和转基因的方法,对于发挥抗病效果的基因具有较好的鉴定能力,但对发挥感病效果基因的鉴定尚缺乏一定的科学性,本实验使用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,通过定向沉默目标基因,可以直观的鉴定候选基因在抗病或感病中发挥的功能,从逻辑上更加完善;且该技术还具有周期短,操作方便简洁的优点。

5. 研究计划与进展

2015年

7月-8月:熟悉实验室环境,学习相应实验技能及仪器操作。播种抗感病小麦品种。

8月-9月:尝试构建vigs载体,进行体外转录,并保存转录产物。

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