1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)株高是水稻最重要的农艺性状之一,直接影响水稻品种的丰产潜力和抗倒性能。
上世纪年代末60年代初,随着矮脚南特、矮仔占、ir8、统一和calrose等一批籼型矮杆高产品种的育成,水稻产量一举提高了20%-30% 以上[1-6],这场水稻的绿色革命通过开展矮化育种和推广矮秆品种带来了产量大幅度提高。
自此,水稻矮源的筛选与创制、株高性状的遗传分析、矮生性及其与株高相关基因的分子定位、株高相关基因的克隆等方面的研究也不断深入。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:1.鉴定插入突变体2.利用tail-pcr技术 找到t-dna 插入位点3.分析该突变体相较于野生型在不同环境下的表型变化研究内容:实验室前期获得一个大群体的t-dna插入突变体库,并获得了一株矮化且晚衰突变体,表型稳定。
southern blot鉴定该突变体t-dna插入的拷贝数,同时设计引物,利用tail-pcr技术找到t-dna插入位点。
在rna水平分析该插入位点的基因引起水稻株高和抗盐性的变化,从而进一步研究目的基因的功能。
3. 研究的方法与方案
研究方法: 本实验在获得株型稳定的突变体基础上,进行dna提取。
在t-dna插入序列上设计特异性引物,利用地高辛标记的southern blot鉴定该突变体t-dna拷贝数。
在已知的t-dna插入序列上设计引物,利用tail-pcr技术以该突变体的gdna为模板进行扩增,取tail-pcr第二轮及第三轮的产物,经琼脂糖凝胶电泳分离后回收。
4. 研究创新点
本试验将水稻的矮杆(抗倒伏)与抗盐(抗逆)性状相结合,所定位到的基因对水稻抗倒伏和抗逆的分子育种具有指导意义。
5. 研究计划与进展
项目 时间 具体工作前期准备工作 2015.10-2015.11 确定课题及实验操作的熟悉T-DNA插入与拷贝数鉴定 2015.11-2015.12 利用插入突变体材料,大提DNA,制备探针进行southern blot,获得插入突变株系寻找T-DNA插入基因组的位置 2015.12-2016.1 利用tail PCR进行大量的PCR,回收tail到的DNA片段,送公司测序,寻找插入位点,插入位置的明确与分析 2016.1-2016.2 对筛选到的候选DNA 位置进行比对分析,在DNA和RNA水平检测是否真的插入生理学表型分析 2016.1-2016.3 将该突变体与野生型种子萌发后进行不同处理,研究突变体的表型变化论文撰写 2016.4-2016.5 处理实验结果,撰写毕业论文,准备答辩
